ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (HPLC) የሞባይል ደረጃ (ኤምፒ) በቋሚ ደረጃ (sorbent) በተሞላ ክሮማቶግራፊ አምድ ውስጥ የሚንቀሳቀስ ፈሳሽ የሆነበት አምድ ክሮማቶግራፊ ዘዴ ነው። የ HPLC አምዶች በአምዱ መግቢያ ላይ በከፍተኛ የሃይድሮሊክ ግፊት ተለይተው ይታወቃሉ, ለዚህም ነው HPLC አንዳንድ ጊዜ "ከፍተኛ ግፊት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ" ተብሎ የሚጠራው.

ንጥረ ነገሮች መለያየት ዘዴ ላይ በመመስረት, የሚከተሉት HPLC አማራጮች ተለይተዋል: adsorption, ክፍልፍል, ion ልውውጥ, መጠን ማግለል, chiral, ወዘተ.

በ adsorption chromatography ውስጥ የንጥረ ነገሮች መለያየት የሚከሰተው ከተዳበረ ወለል ጋር ለምሳሌ ፣ ሲሊካ ጄል ካለው adsorbent ገጽ ላይ ለማጣፈጥ እና ለማቅለጥ ባላቸው ልዩ ችሎታ ምክንያት ነው።

ክፍልፍል HPLC ውስጥ, መለያየት የሚከሰተው በቋሚ ደረጃ (አብዛኛውን ጊዜ በኬሚካላዊ ወደ የማይንቀሳቀስ ሞደም ወለል ላይ የሚተከለው) እና በተንቀሳቃሽ ደረጃ መካከል ያለውን ንጥረ ነገሮች ስርጭት Coefficients መካከል ያለውን ልዩነት ምክንያት ነው.

በፖላሪቲ ላይ በመመስረት, PF እና NP HPLC በመደበኛ-ደረጃ እና በተቃራኒ-ደረጃ የተከፋፈሉ ናቸው.

Normal-phase የዋልታ sorbent (ለምሳሌ ሲሊካ ጄል ወይም ሲሊካ ጄል ከ NH 2 ወይም CN ቡድኖች ጋር) እና የዋልታ ያልሆነ ፒኤፍ (ለምሳሌ ሄክሳን ከተለያዩ ተጨማሪዎች ጋር) የሚጠቀም የክሮማቶግራፊ ልዩነት ነው። በግልባጭ-ደረጃ ስሪት chromatography ውስጥ ያልሆኑ የዋልታ ኬሚካላዊ የተቀየረበት sorbent (ለምሳሌ, ያልሆኑ የዋልታ alkyl radical C 18) እና የዋልታ ተንቀሳቃሽ ደረጃዎች (ለምሳሌ, methanol, acetonitrile).

በ ion ልውውጥ ክሮማቶግራፊ ውስጥ የንጥረ ነገሮች ድብልቅ ሞለኪውሎች ወደ cations እና anion በመፍትሔው ውስጥ ተለያይተዋል ፣ በ sorbent (cation Exchanger ወይም anion exchanger) ውስጥ በሚንቀሳቀሱበት ጊዜ ከሶርበንቱ ionክ ቡድኖች ጋር ባለው የልውውጥ መጠን ምክንያት ይለያያሉ ።

መጠን ማግለል ውስጥ (የወንፊት, ጄል permeation, ጄል filtration) chromatography, ንጥረ ነገሮች ሞለኪውሎች የቋሚ ደረጃ ያለውን ቀዳዳዎች ውስጥ ዘልቆ የተለያየ ችሎታ ምክንያት በመጠን ተለያይተዋል. በዚህ ሁኔታ ውስጥ, ወደ የማይንቀሳቀስ ዙር ዝቅተኛው ቀዳዳዎች ውስጥ ዘልቆ መግባት የሚችል ትልቁ ሞለኪውሎች (ከፍተኛ ሞለኪውላዊ ክብደት ጋር) አምድ ለቀው የመጀመሪያው ናቸው, እና አነስተኛ ሞለኪውላዊ መጠን ጋር ንጥረ ነገሮች ለቀው የመጨረሻ ናቸው.

ብዙውን ጊዜ መለያየት የሚከሰተው በአንድ ጊዜ አይደለም ፣ ግን በብዙ ዘዴዎች በአንድ ጊዜ።

የ HPLC ዘዴ የማንኛውንም ጋዝ ያልሆነ ትንታኔ ጥራት ለመቆጣጠር ሊያገለግል ይችላል። ትንታኔውን ለማካሄድ, ተስማሚ መሳሪያዎች ጥቅም ላይ ይውላሉ - ፈሳሽ ክሮሞግራፍ.

ፈሳሽ ክሮማቶግራፍ አብዛኛውን ጊዜ የሚከተሉትን ዋና ዋና ክፍሎች ያካትታል:

- የ PF ዝግጅት ክፍል ፣ የሞባይል ደረጃ ያለው መያዣ (ወይም በሞባይል ደረጃ ውስጥ የተካተቱት ነጠላ ፈሳሾች ያሉባቸው መያዣዎች) እና የ PF የፍሳሽ ማስወገጃ ስርዓት;

- የፓምፕ ስርዓት;

- የሞባይል ደረጃ ማደባለቅ (አስፈላጊ ከሆነ);

- የናሙና መግቢያ ስርዓት (መርፌ);

- ክሮማቶግራፊክ አምድ (በሙቀት መቆጣጠሪያ ውስጥ ሊጫን ይችላል);

- ማወቂያ;

- የመረጃ አሰባሰብ እና ማቀናበሪያ ስርዓት.

የፓምፕ ስርዓት

ፓምፖች PF ወደ አምድ በተሰጠው ቋሚ ፍጥነት ይሰጣሉ. በመተንተን ወቅት የሞባይል ደረጃ ቅንብር ቋሚ ወይም ሊለያይ ይችላል. በመጀመሪያው ሁኔታ, ሂደቱ ኢሶክራቲክ ተብሎ ይጠራል, እና በሁለተኛው - ቀስ በቀስ. የሞባይል ደረጃን ለማጣራት 0.45 µm የሆነ ቀዳዳ ዲያሜትር ያላቸው ማጣሪያዎች አንዳንድ ጊዜ በፓምፕ ሲስተም ፊት ለፊት ይጫናሉ። ዘመናዊ የፈሳሽ ክሮማቶግራፍ ፓምፕ ሲስተም አንድ ወይም ከዚያ በላይ በኮምፒዩተር የሚቆጣጠሩ ፓምፖችን ያካትታል። ይህ በተወሰነ ፕሮግራም መሰረት የ PF ስብጥርን በ gradient elution ላይ እንዲቀይሩ ያስችልዎታል. የ PF ክፍሎችን በማደባለቅ ውስጥ መቀላቀል በሁለቱም ዝቅተኛ ግፊት (ከፓምፖች በፊት) እና በከፍተኛ ግፊት (ከፓምፖች በኋላ) ሊከሰት ይችላል. የ ቀላቃይ PF እና isocratic elution ወቅት ለማዘጋጀት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል, ነገር ግን ክፍሎች ይበልጥ ትክክለኛ ሬሾ ለ isocratic ሂደት PF ክፍሎች አስቀድሞ በማደባለቅ ማሳካት ነው. ለመተንተን የ HPLC ፓምፖች ከ 0.1 እስከ 10 ml / ደቂቃ ባለው ክልል ውስጥ እስከ 50 MPa ባለው የአምዱ መግቢያ ላይ ባለው ግፊት የ PF ቋሚ ፍሰት መጠን ወደ አምድ እንዲቆይ ያደርጉታል። ይሁን እንጂ ይህ ዋጋ ከ 20 MPa መብለጥ የለበትም. በፖምፖች ዲዛይን ውስጥ በተካተቱ ልዩ የእርጥበት ስርዓቶች የግፊት ግፊት ይቀንሳል. የፓምፕዎቹ የሥራ ክፍሎች ከዝገት-ተከላካይ ቁሳቁሶች የተሠሩ ናቸው, ይህም በ PF ስብጥር ውስጥ ጠበኛ ክፍሎችን መጠቀም ያስችላል.

1

የተረጋገጠ የHPLC-MS/MS ዘዴ የተዘጋጀው ልብ ወለድ 1፣3፣4-ታያዲያዞል አሚኖ አሲድ መገኛ LXT7-09ን ለመለየት እና ለመለካት ነው። የ LHT7-09 ከፍተኛው የጅምላ ስፔክትሮሜትሪክ ማወቂያ በአዎንታዊ አዮን ማወቂያ ሁነታ በ 5500 V በኤሌክትሮስፕራይ ቮልቴጅ እና በ 36 ቮ የዲክላስተር አቅም ላይ ተገኝቷል. የ MRM ሽግግሮች የአዲሱ አሚኖ አሲድ የ 1 ኬሚካላዊ መዋቅር አረጋግጠዋል. ,3,4-ቲያዲያዞል. LXT7-09 ከበርካታ አካላት የቲያዲያዞላይላሚድ ድብልቆች ውጤታማ በሆነ መንገድ ለመለየት ከፍተኛ አፈፃፀም ያለው የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ቀስ በቀስ የተፈጠረ የአሴቶኒትሪል እና የዲዮኒዝድ ውሃ ድብልቅን በመጠቀም በተለያዩ ሬሾዎች ውስጥ እንደ ኤሊየንት ነው። ለእነዚህ ክሮማቶግራፊ ሁኔታዎች፣ ውህድ LHT7-09 የሚቆይበት ጊዜ 11 ደቂቃ እንዲሆን ተወስኗል። ለ LHT7-09 ውህድ በቁጥር ለመወሰን የካሊብሬሽን መፍትሄ የተዘጋጀው የ chromatographic ጫፍ አካባቢ የመፍትሄው ትኩረት ላይ ጥገኛ ነው።

HPLC-ms/ms

ክሮማቶግራፊ

የጅምላ ስፔክትሮሜትሪ

thiadiazole

1. ካዛይሽቪሊ ዩ.ጂ., ፖፖቭ ኤን.ኤስ. አዲስ የቲያዲያዞል ተዋጽኦዎች ፀረ-ብግነት እንቅስቃሴን በማጥናት በፎርማሊን በተፈጠረው የ paw edema በአይጦች / Yu.G. ካዛይሽቪሊ፣ ኤን.ኤስ. ፖፖቭ // ወቅታዊ ጉዳዮችሳይንስ እና ትምህርት. - 2013. - ቁጥር 3. www..

2. አዲስ የቲያዲያዞል ተዋጽኦዎች ከፀረ-ፈንገስ እንቅስቃሴ ጋር / ኤ.ኤስ. Koshevenko [et al.] // በሕክምና ማይኮሎጂ ውስጥ እድገቶች. - 2015. - ቲ. 14. - ፒ. 348-351.

3. የአዲሱ ፉሪል-2-የተተኩ 1,3,4-ቲያዲያዞልስ, 1,2,4-triazoles / T.R. የተቀናጀ እና ፀረ-ቲሞር እንቅስቃሴ. Hovsepyan [et al.] // ኬሚካል-ፋርማሲዩቲካል ጆርናል. - 2011. - ቲ. 45. - ቁጥር 12. - P. 3-7.

4. ፖፖቭ ኤን.ኤስ., ዴሚዶቫ ኤም.ኤ. አዲስ አሚኖ አሲድ ከቲያዲያዞል የተገኘ የከፍተኛ መርዝነት ግምገማ በአይጦች ውስጥ ወደ ውስጥ በሚሰጥበት ጊዜ / N.S. ፖፖቭ, ኤም.ኤ. ዴሚዶቫ // የላይኛው ቮልጋ የሕክምና ጆርናል. - 2016. - ቲ. 15, እትም. 1. - ገጽ 9-12.

5. ፖፖቭ ኤን.ኤስ., ዴሚዶቫ ኤም.ኤ. አዲስ አሚኖ አሲድ ከታያዲያዞል የመነጨ ቁስለት-አልባነት ግምገማ በአይጦች ውስጥ በማህፀን ውስጥ በሚሰጥበት ጊዜ / N.S. ፖፖቭ, ኤም.ኤ. Demidova // የዶክተር-ምረቃ ተማሪ. - 2017. - ቁጥር 1 (80). - ገጽ 71-78

6. በ 2-amino-5-alkyl (arylalkyl) -1,3,4-thiadiazoles / S.A ላይ የተመሰረተ የ phenylthio- እና benzylsulfonylacetic acids amides ውህደት እና ፀረ-ተሕዋስያን እንቅስቃሴ. Serkov [et al.] // ኬሚካል-ፋርማሲዩቲካል ጆርናል. - 2014. - ቲ. 48, ቁጥር 1. - P. 24-25.

7. Arpit K., Basavaraj M., Sarala P., Sujeet K., Satyaprakash K. የ imidazothiadiazole ተዋጽኦዎች ውህደት እና ፋርማኮሎጂካል እንቅስቃሴ // Acta Poloniae Pharmaceutica, የመድሃኒት ምርምር. 2016. ጥራዝ. 73.አይ. 4. ፒ. 937-947.

8. ኢማን ኤም ፍሌፌል፣ ዋኤል ኤ. ኤል-ሰይድ፣ አሽራፍ ኤም. መሐመድ የአዲሱ 1-ቲያ-4-አዛስፒሮዴኬን ውህድ እና ፀረ-ነቀርሳ እንቅስቃሴ፣ የተገኙት Thiazolopyrimidine እና 1,3,4-Thiadiazole Thioglycosides // Molecules። 2017. አይ. 22(1)። P. 170.

9. ሆርጅ አር.ኤ. ዲያዝ, ጄራርዶ ኤንሪኬ ካሚ. ጨው 5-amino-2-sulfonamide-1,3,4-thiadiazole, acetazolamide መካከል መዋቅራዊ እና አናሎግ, ሳቢ ካርቦን anhydrase inhibitory ንብረቶች, የሚያሸኑ, እና anticonvulsant እርምጃ ያሳያሉ // ኢንዛይም inhibition እና የመድኃኒት ኬሚስትሪ ጆርናል. 2016. ጥራዝ. 12.አይ. 6. ፒ. 1102-1110.

10. Naiyuan Chen, Wengui D., Guishan L., Luzhi L. ውህድ እና ፀረ-ፈንገስ እንቅስቃሴ dehydroabietic አሲድ ላይ የተመሠረተ 1,3,4-thiadiazole-thiazolidinone ውህዶች // ሞለኪውላር ልዩነት. 2016. ጥራዝ. 20.አይ. 4. ፒ. 897-905.

11. ዮምና፣ I. ኤል-ጋዛር፣ ሃናን ኤች.ጊዮርጊስ፣ ሻሄንዳ ኤም. ኤል-መስሪ። አዲስ (1,2,4-triazole ወይም 1,3,4-thiadiazole) -ሜቲልቲዮ-የ quinazolin-4(3H) ተዋጽኦዎች -አንድ እንደ DHFR አጋቾቹ // ባዮኦርጋኒክ ኬሚስትሪ ውህደት፣ ባዮሎጂካል ግምገማ እና ሞለኪውላዊ ሞዴሊንግ ጥናት። 2017. ጥራዝ. 72. P. 282-292.

ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ከጅምላ ስፔክትሮሜትሪክ ማወቂያ ጋር በተለያዩ ባዮሎጂያዊ ነገሮች ውስጥ መድሃኒቶችን ለመለየት እና በቁጥር ለመወሰን በጣም ተስፋ ሰጪ ከሆኑ ዘዴዎች አንዱ ነው። ዘዴው በመድኃኒት ጥናት እና በመድኃኒት ቁጥጥር ወቅት መድኃኒቶችን ለመለካት ጥቅም ላይ እንዲውል በሚያስችል ከፍተኛ ትክክለኛነት ፣ ትክክለኛነት እና ንጥረ ነገሮችን በትንሹ የመወሰን ችሎታ ተለይቶ ይታወቃል ፣ ይህም ለክሊኒካዊ የላቦራቶሪ ምርመራዎች ጠቃሚ ነው። ለዚሁ ዓላማ በ HPLC-MS / MS ዘዴ ላይ በመመርኮዝ የተለያዩ የመድኃኒት ንጥረ ነገሮችን, ፈጠራዎችን ጨምሮ በቁጥር ለመወሰን ዘዴዎችን ማዘጋጀት እና ማረጋገጥ አስፈላጊ ነው.

የመጀመሪያው መድሃኒት ስቴሮይድ ካልሆኑ ፀረ-ብግነት መድኃኒቶች ቡድን acexazolamide ነው ፣ አዲስ የ 1,3,4-ቲያዲያዞል አሚድ እና አሲክሳሚክ አሲድ። የዚህ ውህድ ጉልህ ጠቀሜታ ዝቅተኛ መርዛማነት እና ዝቅተኛ ቁስለት (ulcerogenicity) ነው. የፋርማሲኬቲክ ጥናቶችን ለማካሄድ እና የዚህን መድሃኒት ባዮአቫይል በተለያዩ የአስተዳደር መንገዶች ለመገምገም በባዮሎጂካል ፈሳሾች ውስጥ ያለውን የቁጥር መጠን ለመወሰን አስተማማኝ ዘዴ ማዘጋጀት አስፈላጊ ነው.

የዚህ ጥናት ዓላማ HPLC-MS/MS ን በመጠቀም ከቲያዲያዞል ተዋጽኦዎች ቡድን አዲስ ስቴሮይድ ያልሆነ ፀረ-ብግነት መድሐኒት የመለየት እና የመጠን ቴክኒኮችን ማዳበር ነበር።

ቁስአካላት እና መንገዶች

የጥናቱ ዓላማ በ OJSC "VNTs BAV" (Staraya Kupavna) የተዋሃደ የላብራቶሪ ኮድ LHT 7-09 ያለው አዲስ የቲያዲያዞል ተዋጽኦ ነበር በፕሮፌሰር. ኤስ.ያ. ስካቺሎቫ (ምስል 1).

2- (5-ethyl-1,3,4-thiadiazolyl) amide 2-acetylaminohexanoic አሲድ

ሩዝ. 1. የኤልኤችቲ 7-09 ኬሚካላዊ መዋቅር (ጠቅላላ ቀመር፡ C 12 H 20ኤን 4 ኦ 2ኤስ; መንጋጋ የጅምላ 284,4 ግ/ሞል)

ግንኙነት LHT 7-09 መልክዱቄት ነው ነጭ, በተግባር በውሃ ውስጥ የማይሟሟ, በአልኮል ውስጥ የሚሟሟ እና በቀላሉ በ acetonitrile ውስጥ የሚሟሟ.

የተረጋገጠ ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ በጅምላ ስፔክትሮሜትሪክ ማወቂያ (HPLC-MS/MS) ዘዴ LCT 7-09ን ለመለየት እና ለመለካት ጥቅም ላይ ውሏል።

Chromatography የተካሄደው Agilent 1260 InfinityII ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፍ (Agilent Technologies, ጀርመን) በመጠቀም ነው. በጥናቱ ውስጥ Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7 µm 2.1 x 10 ሚሜ የትንታኔ አምድ ጥቅም ላይ ውሏል። በጥናት ላይ ያለውን ውህድ ለመለየት፣ የግራዲየንት ክሮማቶግራፊ ሁነታን አዘጋጅተናል። አሴቶኒትሪል, ዲዮኒዝድ ውሃ እና አሚዮኒየም አሲቴት በተለያዩ ሬሽዮዎች ውስጥ እንደ ኤሌትስ ጥቅም ላይ ውለዋል.

ለጅምላ ስፔክትሮሜትሪ፣ ABSciexQTrap 3200 MD ባለሶስት ባለአራት ጅምላ ስፔክትሮሜትር (ABSciex፣ Singapore) ከኤሌክትሮስፕሬይ ion ምንጭ ጋር (TurboV with TurboIonSpray probe) ጥቅም ላይ ውሏል። የጅምላ ስፔክትሮሜትር በ 6.1 × 10 -2 ሚ.ግ. / ሊ መጠን ውስጥ በ reserpine ሙከራ መፍትሄ በመጠቀም ተስተካክሏል.

የተጠኑ ናሙናዎች የጅምላ ስፔክትሮሜትሪክ ትንተና በኤሌክትሮስፕራይ ሁነታ በቀጥታ ናሙናውን በመርፌ እና በ chromatograph የቀረበውን ኤሌትሌት ተካሂዷል. የፍተሻ ናሙናዎችን በጅምላ ክሮሞግራፍ ውስጥ በቀጥታ መከተብ የተካሄደው በ 4.61 ሚሜ ዲያሜትር በ 10 μl / ደቂቃ ፍጥነት ያለው የሲሪንጅ ፓምፕ በመጠቀም ነው.

አዲስ የቲያዲያዞል አመጣጥን ለመለየት እና ለመለካት ዘዴን በሚፈጥሩበት ጊዜ ከፍተኛ አፈፃፀም ላለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ እና የጅምላ ማወቂያ ጥሩ ሁኔታዎች ተመርጠዋል። ንጥረ ነገሩ ከ chromatographic አምድ የተለቀቀበት ጊዜ እና የኤምአርኤም ሽግግር ግምት ውስጥ ገብቷል (ምዝገባ ተካሂዷል) ኤም/ዘቀዳሚ ion በመጀመርያው የትንታኔ ኳድሮፖል Q1 እና ኤም/ዘየምርት ions በሁለተኛው የትንታኔ ባለአራት ኳድሪፕል Q3). LCT 7-09ን ለመለካት የመለኪያ ግራፍ ከ 0.397 እስከ 397 ng/ml ባለው የማጎሪያ ክልል ውስጥ ተሠርቷል።

እንደ ሶፍትዌር AnalystMD 1.6.2.Software (ABSciex) ጥቅም ላይ ውሏል.

ውጤቶች እና ውይይት

በሙከራ ጥናቱ የመጀመሪያ ደረጃ ላይ የፍተሻውን ናሙና በጅምላ ማወቂያው በቀጥታ በሲሪንጅ ፓምፕ በመጠቀም ወደ ጅምላ ጠቋሚ ውስጥ በማስተዋወቅ ተካሂዷል. በናሙና ዝግጅት ደረጃ የ LHT 7-09 (500 ng / ml) መፍትሄ በ 2: 1 ውስጥ በአሞኒየም አሲቴት (0.1%) ውስጥ በ 2: 1 ጥምርታ ውስጥ በተቀላቀለ ውሃ ውስጥ ተዘጋጅቷል.

ቅድመ ሙከራዎች እንደሚያሳዩት በአዎንታዊ አየኖች መመዝገቢያ ሁኔታ ፣ LHT 7-09 የመወሰን ስሜታዊነት ከፍ ያለ ነበር ፣ እና የጅምላ ስፔክትረም ከአሉታዊ አየኖች ምዝገባ ሁኔታ የበለጠ ኃይለኛ እና የበለጠ መረጃ ሰጪ ነበር ። በዚህ ረገድ, ተጨማሪ ጥናቶች, አዎንታዊ ionization ሁነታ ብቻ ጥቅም ላይ ውሏል.

ኃይለኛ ጫፍ ለማግኘት, መርጠናል የሚከተሉት ሁኔታዎችየጅምላ ማወቂያ : አዎንታዊ ፖላራይዜሽን, ኤሌክትሮስፕሬይ ቮልቴጅ 5500.0 ቪ, እምቅ አቅም እና የመርፌ አቅም - 36.0 እና 6.5 ቮ, በቅደም ተከተል, ከመጋረጃው የጋዝ ግፊት 20.0 psi እና atomization ጋዝ ግፊት 40.0 psi, ፍጥነት 10 μl / ደቂቃ. የፍተሻ ክልሉ 270-300 ዳ ነበር።

የተገኘው የጅምላ ስፔክትረም የመጀመሪያው የትንታኔ ኳድሩፖል Q1 ትንተና እንደሚያሳየው በእነዚህ ሁኔታዎች ውስጥ ሃይድሮጂን ፕሮቲን በመጨመሩ ምክንያት የተጠና ውህድ + የፕሮቲን ሞለኪውል ከዋጋ ጋር ይመሰረታል ። ኤም/ ዝ 285.2 አዎ (ምስል 2).

ሩዝ. 2. የፕሮቲን ሞለኪውል LHT 7-09 (በአዎንታዊ ion + ቅኝት ሁነታ) የጅምላ ስፔክትረም

በሁለተኛው የትንታኔ ባለአራት እጥፍ Q3 ላይ፣ የምርት ionዎች ለቀዳሚው ion ከዋጋው ጋር ተመዝግበዋል m/z 285.2 አዎ. የ 2 ኛ ቅደም ተከተል የጅምላ ስፔክትረም ትንተና ብዙ ጫፎች መኖራቸውን ያሳያል ፣ ከእነዚህ ውስጥ 3 በጣም ኃይለኛ - m/z 114.2 ዳ, m/z 130.2 ዳ እና m/z 75.1 ዳ (ምስል 3).

ሩዝ. 3. የምርት ionዎች የጅምላ ስፔክትረም (በአዎንታዊ ion ቅኝት ሁነታ, ቀዳሚ ionኤም/ ዝ285.2 አዎ)

ከፍተኛ-ጥንካሬ ion ምልክት ለማግኘት በ Q2 ግጭት ሴል ውስጥ በጣም ጥሩው የኃይል ዋጋዎች ተመርጠዋል (ከ 0 እስከ 400 ቮ ያለው የኃይል መጠን ግምት ውስጥ ይገባል). ለምርት ions ከእሴቶች ጋር ኤም/ ዝ 114.2 ዳ, 130.2 ዳ እና 75.1 ዳ በግጭት ሴል ውስጥ ያለው ጥሩው ኃይል 27 ቮ ነው; 23 ቮ እና 49 ቮ.

ከዋጋው ጋር ያለው ምርት ion እንደሆነ ይታሰባል ኤም/ ዝ 114.2 ዳ የ 5-አሚኖ-2-ኤቲል-1,3,4-ታያዲያዞል ቁራጭ ነው, ምክንያቱም የሌሎች 1,3,4-ታያዲያዞል ተዋጽኦዎች መከፋፈል ተመሳሳይ እሴት ያለው የምርት ion ያሳያል. ኤም/ ዝ. የምርት ion ከትርጉም ጋር ኤም/ ዝ 130.2 ዳ ምናልባት የአሲክሳሚክ አሲድ የፕሮቲን ንጥረ ነገር ነው. ስለዚህ, በጥናት ላይ ያለው ናሙና የጅምላ ማወቂያ ውጤቶች የአዲሱ 1,3,4-thiadiazole ተዋጽኦ ኬሚካላዊ መዋቅር አረጋግጠዋል.

በሙከራ ጥናት በሚቀጥለው ደረጃ, የፈተና ውህዱ በ HPLC-mass spectrometry ተተነተነ.

በ HPLC-MS/MS ሁነታ, የሚከተሉት የ ionization ሁኔታዎች ጥቅም ላይ ውለዋል: ኤሌክትሮስፕሬይ ቮልቴጅ 5500.0 V, የሞባይል ደረጃ ፍሰት መጠን 400 μL / ደቂቃ, ናይትሮጅን የሙቀት መጠን 400 ° ሴ, የመጋረጃ ጋዝ እና የሚረጭ ፍሰት ግፊት 20.0 እና 50.0 psi. የነጠላ የጅምላ ስፔክትራ የመቅዳት ፍጥነት በሰከንድ 100 ስፔክትራ ነበር። የተጠቃለለውን የጅምላ ስፔክትረም ለማግኘት, ከ10.5-11.5 ደቂቃዎች የሚፈጀው ጊዜ በ chromatogram ላይ ተመርጧል; በምርት አየኖች ምልክት ጥንካሬ ላይ በመመርኮዝ የ ion አሁኑ ጊዜ ጥገኛ ኩርባዎች እና በጥናት ላይ ካለው ግቢ ጋር የሚዛመዱ የግለሰብ ምልክቶች ከፍተኛ ቦታ ተገንብተዋል ። ወደ ትንታኔው አምድ ውስጥ የገባው የናሙና መጠን 10 μl ነበር።

በጥናት ላይ ያለውን ውህድ ለመለየት፣ ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ የግራዲየንት ሁነታ ጥቅም ላይ ውሏል፣ ይህም ወደ የትንታኔ ዓምድ መግቢያ ላይ ያለውን የኤልኢን ስብጥር በመቀየር የተረጋገጠ ነው። አሴቶኒትሪል, ዲዮኒዝድ ውሃ እና አሚዮኒየም አሲቴት በተለያዩ ሬሽዮዎች ውስጥ እንደ ኤሌትስ ጥቅም ላይ ውለዋል. የግራዲየንት ክሮማቶግራፊ ሁነታ ምርጫው በኢሶክራሲያዊ ኢሊዩሽን ሁነታ ሁኔታዎች (የተለያዩ የአሴቶኒትሪል መጠንን ሲጠቀሙ ጨምሮ) የመሞከሪያውን የተመጣጠነ ቅርጽ ከቆይታ ጊዜ ጋር ማግኘት ባለመቻሉ ነበር። ለመተንተን ተስማሚ. በጥናቱ መሰረት, እጅግ በጣም ጥሩው የኤሌክትሮል አቅርቦት ሁነታ: ከ 0 እስከ 4 ደቂቃዎች, የአሴቶኒትሪል ክምችት 1% ነው; ከ 4 እስከ 8 ደቂቃዎች, የአሴቶኒትሪል መጠን ወደ 99% ቀጥተኛ ጭማሪ; ከ 8 እስከ 12 ደቂቃዎች - isocratic ክፍል (1% አሴቶኒትሪል). ጥናቱ ከተጠናቀቀ በኋላ, ክሮሞቶግራፊ ዓምድ በ 30% አሴቶኒትሪል መፍትሄ ለ 5 ደቂቃዎች ታጥቧል.

የተገለጸውን ክሮሞግራፊ ሁነታን በሚጠቀሙበት ጊዜ ለተጠናው ውህድ በቂ ጥንካሬ ያለው የተመጣጠነ ጫፍ ተገኝቷል (ምስል 4).

ሩዝ. 4. Chromatogram LHT 7-09 (የትንታኔ አምድቀልጣፋPoroshell 120 EC-C18 2.7 µm 2.1×10 ሚሜ; ቀስ በቀስ ክሮማቶግራፊ ሁነታ)

የተገኙት ክሮሞግራም ለ LCT 7-09 ለተለያዩ ውህዶች መፍትሄዎች ትንተና እንደሚያሳየው በእነዚህ የመለጠጥ ሁኔታዎች ውስጥ የማቆየት ጊዜ (tR) 11 ደቂቃ ሲሆን በጥናት ላይ ባለው ንጥረ ነገር ላይ የተመሰረተ አይደለም. በዚህ ረገድ, የማቆያ ጊዜ እሴቱ የ LHT 7-09 በበርካታ ክፍሎች ድብልቅ ውስጥ ያለውን ትክክለኛነት ለማረጋገጥ እንደ ተጨማሪ መስፈርት ሊያገለግል ይችላል. ትኩረት የሚስበው እነዚህ ክሮማቶግራፊ መለኪያዎች LHT 7-09 በጅምላ ማወቂያን ብቻ ሳይሆን ፎቶሜትሪክን ጨምሮ ሌሎች መመርመሪያዎችን ለመለየት ጥቅም ላይ መዋል መቻላቸው ነው።

አዲሱን የቲያዲያዞል መገኛን ለመለካት ከ 0.397 ng/ml እስከ 397 ng/ml ባለው የማጎሪያ ክልል ውስጥ የካሊብሬሽን ግራፍ ተገንብቷል (ምስል 5)።

ሩዝ. 5. የ LCT 7-09 ትኩረትን ለመወሰን የካሊብሬሽን ግራፍ (ከ abcissa ዘንግ ጋር የ LCT 7-09 በ ng/ml ውስጥ ነው ፣ በ ordinate axis በኩል የልብ ምት ውስጥ ከፍተኛ ቦታ ነው)

የካሊብሬሽን መፍትሄን ለማዘጋጀት, የ LHT 7-09 መፍትሄዎች በ 0.397 ውህዶች ውስጥ ጥቅም ላይ ውለዋል. 1.980; 3.970; 19.8; 39.7; 198.0; 397.0 ng / ml. የከፍተኛው አካባቢ ጥገኝነት በተጠናው ውህድ ውህድ ላይ ያለው ጥገኛ በሚከተለው የመመለሻ ቀመር ተገልጿል፡

y= 8.9e 5 · x 0.499፣ የሪግሬሽን ኮፊሸንት ዋጋ r=0.9936 ነበር።

የዳበረ የካሊብሬሽን መፍትሔ የተጠናውን ውህድ በከፍተኛ መጠን አሃዛዊ ቁርጠኝነት በስፋት እንዲታይ የሚያደርግ በመሆኑ ይህንን ዘዴ የመድኃኒት ንጥረ ነገርን ጥራት ለመገምገም እና የፋርማሲኬቲክ ጥናቶችን ለማካሄድ እንደሚያስችል ልብ ሊባል ይገባል።

ስለዚህም የጥናቱ ውጤት ኤች.ፒ.ኤል.ሲ.-ኤም.ኤስ/ኤምኤስ በመጠቀም የቲያዲያዞል አዲስ የአሚኖ አሲድ ተዋጽኦን ለመለየት እና ለመለካት የሚያስችል ዘዴ ተፈጠረ።

መደምደሚያዎች

1. HPLC-MS/MS የቲያዲያዞል አዲስ የአሚኖ አሲድ ተዋጽኦን በከፍተኛ ትክክለኛነት ለመለየት እና ለመለካት ያስችላል።
2. የአዲሱ የቲያዲያዞል አመጣጥ LHT 7-09 በጅምላ ማግኘቱ በአዎንታዊ ion ቅኝት ሁነታ (ኤምአርኤም ሽግግር - ቅድመ ion Q1) መከናወን አለበት ። ኤም/ ዝ 285.2 አዎ; የምርት ions Q3 ኤም/ ዝ 114.2 ዳ, ኤም/ ዝ 130.2 ዳ እና ኤም/ ዝ 75.1 ዳ)
3. LCT 7-09 ከበርካታ አካላት ውህዶች ለመለየት ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ቴክኒክ ተዘጋጅቷል (የትንታኔ አምድ Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7 μm 2.1 × 10 mm; eluent acetonitrile: deionized water: ammonium acetate; gradient mode).

መጽሐፍ ቅዱሳዊ አገናኝ

Popov N.S., Malygin A.S., Demidova M.A. የ HPLC-MS/MS አዲስ የቲዲያዞል አመጣጥን ለመለየት እና በቁጥር ለመወሰን ዘዴን ማዳበር // ዘመናዊ የሳይንስ እና የትምህርት ችግሮች። - 2017. - ቁጥር 5.;
URL፡ http://science-education.ru/ru/article/view?id=26988 (የመግባቢያ ቀን፡ 02/01/2020)። በማተሚያ ቤት "የተፈጥሮ ሳይንስ አካዳሚ" የታተሙ መጽሔቶችን ወደ እርስዎ ትኩረት እናመጣለን

ቁልፍ ቃላት

ስቴሮይድስ / LIPIDS / የደም ሴረም / ሜታቦሊክ ፕሮፋይል / የኢንዱስትሪ ቆሻሻ/ ስቴሮይድስ / ሊፒድስ / የደም ሴረም / ሜታቦሊክ ፕሮፋይል / የኢንዱስትሪ ቆሻሻዎች

ማብራሪያ በእንስሳት ሕክምና ሳይንስ ላይ ሳይንሳዊ ጽሑፍ ፣ የሳይንሳዊ ሥራ ደራሲ - ቻኮቭስኪ ፓቬል አናቶሊቪች ፣ ያንሴቪች አሌክሲ ቪክቶሮቪች ፣ ዲሚትሮቼንኮ አሌስያ ኢጎሮቪና ፣ ኢቫንቺክ አሌክሳንደር ቪክቶሮቪች

ተጽዕኖ አንትሮፖጂካዊ ምክንያቶችበሰው እና በእንስሳት አካል ላይ ሁለገብ ተጽእኖ አለው. በተወሳሰቡ ተጽእኖዎች ምክንያት የነጠላ ምክንያቶች አሉታዊ ተፅእኖዎችን መለየት በጣም ከባድ ስራ ነው. እነዚህን ችግሮች ለማሸነፍ የሚያስችል ሜታቦሎሚክ ዘዴ ፣ የፖታስየም ማዳበሪያዎችን በማምረት የቆሻሻ መጣያ ተፅእኖ ምንነት እና መጠን በሙከራ እንስሳት ላይ ባለው የሊፕታይድ መገለጫዎች ላይ የፖታስየም ማዳበሪያዎችን በማምረት እና በአፍንጫ ውስጥ በሚበቅሉበት ጊዜ ጥቅም ላይ ይውላል ። ፍጆታ ውሃ መጠጣት, በፖታሽ ምርት እምቅ ዞን ውስጥ ከሚገኙ ምንጮች የተገኘ. የሊፒድስን ከሴረም መለየት የተካሄደው በጠንካራ-ደረጃ ማውጣት ላይ የተመሰረተ ልዩ የተሻሻለ ቴክኒክ በመጠቀም ነው, ይህም ኮሌስትሮልን ከናሙናዎቹ ውስጥ ለማስወገድ ያስችላል. እያንዳንዱ ናሙና ከፍተኛ አፈጻጸም ባለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ በ mass spectrometric detection (HPLC-MS) የተተነተነ ሲሆን ከዚያ በኋላ የተገኙት ክሮማቶግራሞች የዋና አካል ትንተና (PCA) እና የክላስተር ትንተና በመጠቀም ተካሂደዋል። የተሻሻለው ቴክኒክ በደም ሴረም ውስጥ የሃይድሮፎቢክ ሜታቦሊቲዎችን በብቃት ለመለየት ያስችላል። የሙከራ እንስሳት የደም ሴረም የሊፕይድ ፕሮፋይል በተለይም የ phospholipids እና oxysteroids ይዘት, እና በሜታቦሊክ ሂደቶች ውስጥ በሙከራ እና በቁጥጥር እንስሳት መካከል ልዩነት ተገኝቷል. በሙከራ እንስሳት የደም ሴረም ውስጥ, ከቁጥጥር ቡድን ጋር ሲነፃፀር የኦክሲስትሮይድ ክምችት ጨምሯል.

ተዛማጅ ርዕሶች በእንስሳት ህክምና ሳይንስ ላይ ሳይንሳዊ ስራዎች, የሳይንሳዊ ስራ ደራሲው ቻኮቭስኪ ፓቬል አናቶሊቪች, ያንሴቪች አሌክሲ ቪክቶሮቪች, ዲሚትሮቼንኮ አሌስያ ኢጎሮቭና, ኢቫንቺክ አሌክሳንደር ቪክቶሮቪች ናቸው.

• የኢንደስትሪ ፍሪኩዌንሲ ስፋት-የተቀየረ መግነጢሳዊ መስክ ለመጋለጥ የአይጥ ጉበት ሄፕታይተስ የአካል ክፍሎች ምላሽ።

  2014 / Belkin Anatoly Dmitrievich, Michurina Svetlana Viktorovna

• በጥሬ ሥጋ ውስጥ የሆርሞን መድኃኒቶችን በብዛት መምረጥ። ß-Agonist ትንተና

  2016 / ኩሊኮቭስኪ A.V., Kuznetsova O.A., Ivankin A.N.

• የውሃ ውስጥ ፍጥረታት ውስጥ ubiquinone ለመወሰን ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ትግበራ.

  2003 / Rybin V.G.

• የ N7-ethyl] -ጓኒን በአይጥ ሽንት ውስጥ እንደ የሰልፈር ሰናፍጭ መጋለጥ ምልክት

  2017 / ኦርሎቫ ኦልጋ ኢጎሬቭና ፣ ካራካሼቭ ጆርጂ ቫሲሊቪች ፣ ሽሙራክ ቭላድሚር ኢጎሬቪች ፣ አብዚኒዜዝ ቪክቶሪያ ቭላድሚሮቭና ፣ ሳቬሌቫ ኢሌና ኢጎሬቭና

• የ HPLC-MS ዘዴ ልማት ursodeoxycholic አሲድ በአዎንታዊ ክስ አየኖች ማወቂያ ሁነታ ላይ ትንተና.

  2013 / ክራስኖቭ ኢሊያ አሌክሳንድሮቪች ፣ ቦብኮቭ ዲ.ኢ. ፣ ዛይሴቫ ኤም ፣ ፕሪስያች ኤስ.ኤስ. ፣ ክራስኖቭ ኤን.ቪ.

• ተላላፊ እና ብግነት በሽታዎችን በፍጥነት ለመመርመር በ thromdefensins ላይ የተመሠረተ አዲስ ትውልድ የሙከራ ስርዓቶችን ለመፍጠር የቴክኖሎጂ ልማት።

  2015 / ኢቫኖቭ ዩሪ ቦሪሶቪች, ቫሲልቼንኮ አሌክሲ ሰርጌቪች

• ካርባማዜፔይን እና ካርባማዜፔይን-10,11-ኢፖክሳይድ በ HPLC-MS/ms በአንድ ጊዜ የመወሰን ዘዴ

  2015 / Rodina T.A., Melnikov E.S., Sokolov A.V., Prokofiev A.B., Arkhipov V.V., Adamov G.V., Pozdnyakov D.L., Olefir Yu.V.

• የሰባ አሲዶች እና የአትክልት ዘይቶች ስቴሮይድ ጥንቅር

  2006 / Khasanov V.V., Ryzhova G.L., Dychko K.A., Kuryaeva T.T.

• ክሮማቶግራፊ-mass spectrometry በመጠቀም gidazepam በባዮሎጂካል ቁሳቁስ ውስጥ ለመወሰን ዘዴን ማዳበር እና ማረጋገጥ

  2015 / ኤ.ቪ. ቹቤንኮ, ኤም.ኤ. ሳቭቼንኮ

• ለህክምና መድሃኒት ክትትል በደም ሴረም ውስጥ የ cyclosporine a መወሰን

  2008 / Fedorova G.A., Podolskaya E.P., Novikov A. V., Lyutvinsky Ya. I., Krasnov N.V.

በጊኒ አሳማዎች ውስጥ ያለው የሴረም ሊፒድ መገለጫዎች ትንተና ለአካባቢ ብክለት ተጋላጭ የሆኑ የሜታቦሊዝም ለውጦችን አስቀድሞ ለማወቅ።

ለአንትሮፖጂካዊ ምክንያቶች መጋለጥ በሰውና በእንስሳት አካል ላይ ዘርፈ ብዙ ተጽእኖ አለው። በእነርሱ ውስብስብ ተጽእኖ ምክንያት የአንዳንድ ምክንያቶች አሉታዊ ተፅእኖዎችን መለየት በጣም የተወሳሰበ ስራ ነው. እነዚህን ችግሮች ለመቅረፍ የሚፈቅደው ሜታቦሎሚክ ዘዴ የፖታሽ ማዳበሪያ ምርት ብክነትን ምንነት እና ደረጃ በሙከራ እንስሳት ላይ ያለውን የሊፒድ መገለጫዎች በአፍንጫ ውስጥ ከተከተቡ በኋላ እና ከምንጩ የሚገኘውን የመጠጥ ውሃ ፍጆታ በመገምገም ተግባራዊ ተደርጓል። በፖታስየም ማዳበሪያ ምርት እምቅ እርምጃ ዞን ውስጥ ይገኛል. ኮሌስትሮልን ከናሙናዎቹ ውስጥ ለማስወገድ በሚያስችል ጠንካራ-ደረጃ ናሙናዎችን በማውጣት ላይ በመመርኮዝ በልዩ የተሻሻለ ቴክኒክ በመታገዝ ከሴረም ውስጥ ቅባቶችን ማግለል ተከናውኗል። እያንዳንዱ ናሙና ለ HPLC-MS ትንተና ተካሂዷል, ከዚያ በኋላ የተገኙት ክሮሞግራም በዋና አካል ትንተና እና ክላስተር ትንተና ዘዴ ጥቅም ላይ ይውላል. የተሻሻለው ቴክኒክ በደም ሴረም ውስጥ የሃይድሮፎቢክ ሜታቦሊቲዎችን በብቃት ለመለየት ያስችላል። የሙከራ እንስሳት በተለይም የ phospholipids እና oxysteroids ይዘት የተረጋገጠ የሴረም lipid መገለጫ ነበር ፣ እና በምርመራ እና በእንስሳት ቁጥጥር ሜታብሊክ ሂደቶች ውስጥ ልዩነቶች ተገኝተዋል። በሙከራ እንስሳት ሴረም ውስጥ ከቁጥጥር ቡድን ጋር ሲነፃፀር የሃይድሮክሲስተሮይድ ክምችት መጨመር ይታያል ።

የሳይንሳዊ ሥራ ጽሑፍ በርዕሱ ላይ "ለአካባቢ ብክለት ሲጋለጡ በሜታቦሊዝም ላይ ቀደምት ለውጦችን ለመለየት የጊኒ አሳማ የደም ሴረም lipid መገለጫዎችን ለመተንተን የHPLC-MS ዘዴ"

[ጅብ እና ጽዳት 3/2014

Chakhovsky P.A.1, Yantsevich A.V.2, Dmitrochenko A.E.2, Ivanchik A.V.2

የ HPLC-MS-ቴክኒክ የሴረም ሊፒድ መገለጫዎች ትንተና

የጊኒ አሳማዎች ለአካባቢ ብክለት ሲጋለጡ ቀደምት የሜታቦሊክ ለውጦችን ለመለየት

TU "የሪፐብሊካን ሳይንሳዊ እና ተግባራዊ የንጽህና ማዕከል", 220012, ሚንስክ, የቤላሩስ ሪፐብሊክ; የቤላሩስ ብሔራዊ የሳይንስ አካዳሚ የባዮኦርጋኒክ ኬሚስትሪ ተቋም፣ 220141፣ ሚንስክ፣ የቤላሩስ ሪፐብሊክ

የአንትሮፖጂካዊ ምክንያቶች ተጽእኖ በሰው እና በእንስሳት አካል ላይ ሁለገብ ተጽእኖ አለው. በተወሳሰቡ ተጽእኖዎች ምክንያት የነጠላ ምክንያቶች አሉታዊ ተፅእኖዎችን መለየት በጣም ከባድ ስራ ነው. እነዚህን ችግሮች ለመወጣት የሚያስችል ሜታቦሎሚክስ ዘዴ የፖታሽ ማዳበሪያን በማምረት በሙከራ እንስሳት ላይ ያለውን የቆሻሻ መጠን ምንነት እና ተፅእኖን ለመገምገም ጥቅም ላይ የዋለ ሲሆን በአፍንጫው ውስጥ ከፖታሽ ማዳበሪያ እና የፍጆታ ብክነት ጋር በክትባት ወቅት ጥቅም ላይ ይውላል ። የፖታሽ ምርት እምቅ እርምጃ በዞኑ ውስጥ ከሚገኙ ምንጮች የተገኘ የመጠጥ ውሃ. የሊፒድስን ከሴረም መለየት የተካሄደው በጠንካራ-ደረጃ ማውጣት ላይ የተመሰረተ ልዩ የተሻሻለ ቴክኒክ በመጠቀም ነው, ይህም ኮሌስትሮልን ከናሙናዎቹ ውስጥ ለማስወገድ ያስችላል. እያንዳንዱ ናሙና ከፍተኛ አፈጻጸም ባለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ በ mass spectrometric detection (HPLC-MS) የተተነተነ ሲሆን ከዚያ በኋላ የተገኙት ክሮማቶግራሞች የዋና አካል ትንተና (PCA) እና የክላስተር ትንተና በመጠቀም ተካሂደዋል። የተሻሻለው ቴክኒክ በደም ሴረም ውስጥ የሃይድሮፎቢክ ሜታቦሊቲዎችን በብቃት ለመለየት ያስችላል። የሙከራ እንስሳት የደም ሴረም የሊፕይድ ፕሮፋይል በተለይም የ phospholipids እና oxysteroids ይዘት, እና በሜታቦሊክ ሂደቶች ውስጥ በሙከራ እና በቁጥጥር እንስሳት መካከል ልዩነት ተገኝቷል. በሙከራ እንስሳት የደም ሴረም ውስጥ, ከቁጥጥር ቡድን ጋር ሲነፃፀር የኦክሲስትሮይድ ክምችት ጨምሯል.

ቁልፍ ቃላት: ስቴሮይድ; ቅባቶች; የደም ሴረም; የሜታቦሊክ ፕሮፋይል; የኢንዱስትሪ ቆሻሻ.

P.A. Chakhovskiy1, A.V Yantsevich2, A.E. Dmitrochenko2, A.V. Ivanchik2 - በጊኒ አሳማዎች ውስጥ የሴረም ሊፒድ ፕሮፋይሎችን ትንተና ለአካባቢ ጥበቃ ተጋላጭነት በሜታቦሊዝም ውስጥ ያለውን ለውጥ አስቀድሞ ለማወቅ

1 የሪፐብሊካን ሳይንሳዊ እና ተግባራዊ የንጽህና ማእከል, ሚንስክ, የቤላሩስ ሪፐብሊክ, 220012; 2 የባዮኦርጋኒክ ኬሚስትሪ ተቋም ፣ ሚንስክ ፣ የቤላሩስ ሪፐብሊክ ፣ 220141

ለደብዳቤ፡ Chakhovsky Pavel Anatolyevich፣ chahovsky@gmail. ኮም

ለአንትሮፖጂካዊ ምክንያቶች መጋለጥ በሰውና በእንስሳት አካል ላይ ዘርፈ ብዙ ተጽእኖ አለው። በእነርሱ ውስብስብ ተጽእኖ ምክንያት የአንዳንድ ምክንያቶች አሉታዊ ተፅእኖዎችን መለየት በጣም የተወሳሰበ ስራ ነው. እነዚህን ችግሮች ለመቅረፍ የሚፈቅደው ሜታቦሎሚክ ዘዴ የፖታሽ ማዳበሪያ ምርት ብክነትን ምንነት እና ደረጃ በሙከራ እንስሳት ላይ ያለውን የሊፒድ መገለጫዎች በአፍንጫ ውስጥ ከተከተቡ በኋላ እና ከምንጩ የሚገኘውን የመጠጥ ውሃ ፍጆታ በመገምገም ተግባራዊ ተደርጓል። የፖታስየም ማዳበሪያ ምርት እምቅ እርምጃ በዞኑ ውስጥ ይገኛል። ኮሌስትሮልን ከናሙናዎቹ ውስጥ ለማስወገድ በሚያስችል ጠንካራ-ደረጃ ናሙናዎችን በማውጣት ላይ በመመርኮዝ በልዩ የተሻሻለ ቴክኒክ በመታገዝ ከሴረም ውስጥ ቅባቶችን ማግለል ተከናውኗል። እያንዳንዱ ናሙና ለ HPLC -MS ትንተና ተካሂዷል, ከዚያ በኋላ የተገኙት ክሮሞግራም በዋና አካል ትንተና እና ክላስተር ትንተና ዘዴ ጥቅም ላይ ይውላል. የተሻሻለው ቴክኒክ በደም ሴረም ውስጥ የሃይድሮፎቢክ ሜታቦሊቲዎችን በብቃት ለመለየት ያስችላል። የሙከራ እንስሳት በተለይም የ phospholipids እና oxysteroids ይዘት የተረጋገጠ የሴረም lipid መገለጫ ነበር ፣ እና በምርመራ እና በእንስሳት ቁጥጥር ሜታብሊክ ሂደቶች ውስጥ ልዩነቶች ተገኝተዋል። በሙከራ እንስሳት ሴረም ውስጥ ከቁጥጥር ቡድን ጋር ሲነፃፀር የሃይድሮክሲስተሮይድ ክምችት መጨመር ይታያል ።

ቁልፍ ቃላት: ስቴሮይድ, ሊፒድስ, የደም ሴረም, የሜታቦሊክ ፕሮፋይል, የኢንዱስትሪ ቆሻሻዎች.

መግቢያ

የስርዓተ ባዮሎጂ እና ተግባራዊ ጀነቲክስ በጣም አስፈላጊ ከሆኑ ተግባራት ውስጥ አንዱ ፕሮቲዮሚክስ ፣ ትራንስክሪፕትሚክስ እና በሰውነት ውስጥ ስለሚከሰቱ ሜታብሊክ ሂደቶች መረጃ ውህደት ነው። በሰውነት ውስጥ የሚከሰት ማንኛውም በሽታ ወይም የስነ-ሕመም ሂደት በቲሹዎች እና በደም ውስጥ በሚገኙ ዝቅተኛ ሞለኪውላዊ ክብደት ሜታቦሊዝም ይዘት ውስጥ ይንጸባረቃል. በደም ፕላዝማ ውስጥ ላሉት ዝቅተኛ ሞለኪውላዊ ክብደት ሜታቦላይቶች ዋና ባህሪያት “ሜታቦሊክ ፕሮፋይል” የሚለው ቃል በ 1971 ተጀመረ። በርካታ የሜታቦላይት ክፍሎችን በአንድ ጊዜ የሚደረግ ትንተና እጅግ በጣም አስቸጋሪ እና ተግባራዊ ሊሆን የማይችል ስለሆነ፣ የኑክሌር ማግኔቲክ ሬዞናንስ (NMR) ስፔክትሮስኮፒን ጨምሮ ተከታታይ ቴክኒኮች የሜታቦሊክ ፕሮፋይሎችን ለማጥናት በተለምዶ ጥቅም ላይ ይውላሉ። ከፍተኛ ጥራትእና ክሮማቶግራፊ - የጅምላ ስፔክትሮሜትሪ.

እንደ ደንቡ, የሜታቦሚክ ጥናቶችን በሚያካሂዱበት ጊዜ, ናሙና በሚዘጋጅበት ጊዜ ከሌሎች አካላት ተለይተው ለተወሰኑ ንጥረ ነገሮች ቡድን የተገደቡ ናቸው. የተገኘው የቡድን መረጃ ለመተርጎም ቀላል ነው.

የሜታቦሊክ መገለጫዎች (በተለይ የሽንት እና የደም ፕላዝማ) መርዛማ ውህዶችን በመውሰዳቸው ምክንያት የሚመጡትን የፊዚዮሎጂ ለውጦች ምንነት ለመወሰን ጥቅም ላይ ሊውሉ ይችላሉ. በአብዛኛዎቹ ሁኔታዎች, የተስተዋሉ ለውጦች እንደ ጉበት እና የአፕቲዝ ቲሹ የመሳሰሉ የተወሰኑ ጉዳቶችን ተጨማሪ ባህሪያት ሊሰጡ ይችላሉ.

በደም ሴረም ውስጥ የስቴሮይድ እና የሊፒዲዶች ትንተና ትልቅ የመመርመሪያ አቅም አለው. የደም ሴረም ፣ የስቴሮይድ ሆርሞኖች ፣ ቅድመ-ግዶቻቸው እና የሜታብሊክ ለውጦች ምርቶች የሊፕድ ስብጥር ብዙ የአካል መለኪያዎችን ያሳያሉ። እነዚህ ንጥረ ነገሮች በሜታቦሊዝም እና የልብና የደም ሥር (cardiovascular) ተግባር ቁጥጥር ውስጥ ጠቃሚ የማስተባበር ሚና ይጫወታሉ እና በሰውነት ውስጥ ለከባድ እና ለከባድ ውጥረት ምላሽ ውስጥ ይሳተፋሉ።

የስቴሮይድ ፕሮፋይል ከተዳከመ ውህደት እና ከስቴሮይድ ሆርሞኖች ሜታቦሊዝም ጋር ለተያያዙ በርካታ የማህፀን እና ኦንኮሎጂ በሽታዎች ልዩ የምርመራ መስፈርት ሲሆን አንዳንዶቹ ሊታወቁ የሚችሉት በስቴሮይድ ፕሮፋይል ብቻ ነው። በመገለጫ ትንተና, የመጠቀም እድል ፍጹም እሴቶችእንደ ቀላል ተለዋዋጮች እና ከተለመደው ጋር ማወዳደር. ይሁን እንጂ የመጠን ጥምርታ መቀየር የበለጠ አስፈላጊ ሊሆን ይችላል. በተጨማሪም የስቴሮይድ ፕሮፋይል በተመሳሳይ ጊዜ ስለ ብዙ ቁጥር ስቴሮይድ መረጃ ይሰጣል.

የሴረም ስቴሮይድ ፕሮፋይል መወሰን ሁሉንም የስቴሮይድ ሜታቦሊዝም መዛባትን ለመለየት ውጤታማ ዘዴ ነው ፣ ይህም ለመመርመር ያስችላል።

ብዙ ክሊኒካዊ ሁኔታዎች ውስጥ ትክክለኛ ምርመራ, ለምሳሌ, ለሰውዬው የሚረዳህ ሃይፐርፕላዝያ ጋር, አይነት I hyperaldosteronism, ዋና hyperaldosteronism, Itsenko-ኩሺንግ በሽታ, የሚረዳህ insufficiency, ወዘተ. እንዲሁም ሃይፖታላሚክ ፒቱታሪ-አድሬናል እጥረት.

የፖታስየም ማዳበሪያ ብክነት ዋና አካል የሆነው ጨው ከመጠን በላይ የሰውነት ክብደት ያላቸው የሙከራ አይጦችን ወደ ሰውነት መውሰዱ የአልዶስተሮን ውህደት ከመጠን በላይ እንዲነቃ እና ከሜታቦሊክ ሲንድሮም ጋር የደም ግፊት እና የኩላሊት ጉዳት ያስከትላል።

ጋር የኢንዱስትሪ ምርት ክልሎች ውስጥ ከፍተኛ ዲግሪየአካባቢ ብክለት ፣ የህዝቡ የበሽታ መጠን ብዙውን ጊዜ በአንጻራዊ “ንፁህ” ክልሎች ከፍ ያለ ነው። የጥናታችን ዓላማ በሶሊጎርስክ ከተማ በትላልቅ የማዕድን ቁፋሮ እና የፖታሽ ማዕድን ማቀነባበሪያዎች ውስጥ ትገኛለች። በፖታሽ ተክሎች የጨው ክምችት እና ዝቃጭ ማከማቻ ቦታዎች የክሎራይድ-ሶዲየም ጨዋማ ዞን ተፈጥሯል, ይህም የከርሰ ምድር ውሃን ከ 100 ሜትር በላይ ጥልቀት ይሸፍናል, ይህም የመጠጥ ውሃ አቅርቦትን እና የከባቢ አየር አየርን መበከል ሊጎዳ ይችላል. .

የፖታሽ ማዳበሪያ ኢንዱስትሪያል ምርት ክልል ውስጥ የግለሰብ የአካባቢ ክፍሎች ብክለት ተጽዕኖ ለመገምገም, እኛ ኬሚካሎች ድብልቅ ተጽዕኖ ሥር መጀመሪያ ተፈጭቶ መታወክ አመላካች እንደ የደም የሴረም lipid መገለጫዎች ተንትነዋል.

የሥራው ዓላማ ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊን በጅምላ ስፔክትሮሜትሪ በመጠቀም የፖታስየም ማዳበሪያን በማምረት ለቆሻሻ መጋለጥ እና በምርት ብክነት ሊጎዱ ከሚችሉ ምንጮች የሚገኘውን የመጠጥ ውሃ ፍጆታ የላብራቶሪ እንስሳትን የሜታቦሊክ ለውጦችን መለየት ነው። (HPLC-MS)

የጥናቱ ዓላማ የሙከራ እና የቁጥጥር ቡድኖች የሙከራ እንስሳት (ጊኒ አሳማዎች) የደም ሴረም ነበር።

ቁስአካላት እና መንገዶች

የሙከራ ጥናቶችበ 35 ጊኒ አሳማዎች (17 ሴቶች እና 18 ወንዶች) ክብደት 305-347 ግ.

[ጅብ እና ጽዳት 3/2014

የሙከራ ቡድን (ከኢንዱስትሪ ምርት ውስጥ ከፖታሽ ማዳበሪያዎች እና ከሶሊጎርስክ የውሃ አቅርቦት ስርዓት የመጠጥ ውሃ) 20 ግለሰቦች (10 ሴቶች እና 10 ወንዶች) ።

የቁጥጥር ቡድን (በፕሪሚንግ አሠራር ምክንያት የሚፈጠረውን የጭንቀት መንስኤ ተጽእኖን ለማስወገድ በ isotonic sodium chloride solution ፕሪሚንግ), 15 ግለሰቦች (8 ወንዶች እና 7 ሴቶች).

በሙከራው ወቅት የእንስሳት አጠቃላይ ሁኔታ, የምግብ እና የውሃ ፍጆታ በየቀኑ ክትትል ተደርጓል.

የፖታስየም ማዳበሪያዎችን በማምረት ለከባድ የመተንፈስ ተጋላጭነት (12 ሳምንታት) ብክነትን ለመምሰል ፣ በ MU.ቁጥር 11-11-10-2002 ተመርተናል "ፕሮቲን የያዙ የአየር አየር ንፅህና ቁጥጥር በሚደረግበት ጊዜ መርዛማ እና የአለርጂ ጥናቶችን ለማካሄድ የሚያስፈልጉ መስፈርቶች የሥራ ቦታ አየር ", የፕሪሚንግ መጠን መወሰንን ጨምሮ. ከጨው ቆሻሻ መጣያ ናሙናዎች በእብነ በረድ ሙቀጫ ውስጥ ተፈጭተው ወደተመሳሳይ አቧራማ ሁኔታ በተቀላቀለ ውሃ ውስጥ ወደሚፈለገው መጠን ይሟሟቸዋል፣የሙከራ እንስሳትን የሰውነት ክብደት ግምት ውስጥ በማስገባት (የሰውነት ክብደት መጠኑን ለማስተካከል በየሳምንቱ ክትትል ይደረግበታል)። የተሰላው መጠን: በሙከራው መጀመሪያ ላይ - 2.028 mg / 0.1 cm3, ከ 4 ሳምንታት በኋላ - 2.85 mg / 0.1 cm3, ከ 6 ሳምንታት በኋላ - 3.17 mg / 0.1 cm3, ከ 8 ሳምንታት በኋላ እና እስከ መጨረሻው ሙከራ 3.8 mg / 0.1 ሴሜ 3.

ማደንዘዣ የሌለበት ጊኒ አሳማ በአግድም አቀማመጥ ላይ ተስተካክሎ ጭንቅላቱን ወደ ላይ ከፍ በማድረግ የተወሰነ መጠን ያለው የሞቀ መፍትሄ በማስነጠስ ለመከላከል በሚያስችል መንገድ በፔፕት ማሰራጫ (ከ2-3 ደቂቃ በላይ) በአማራጭ ወደ አፍንጫው ውስጥ ገብቷል ። . በዚህ ምክንያት የሚመጡት "ማቅለጫ" ድምፆች የመፍትሄውን ወደ መተንፈሻ ቱቦ ውስጥ መግባቱን አረጋግጠዋል.

የሙከራው የእንስሳት ቡድን ድብልቁን በቀን አንድ ጊዜ በሳምንት 5 ቀናት ለ 12 ሳምንታት "በመተንፈስ" ነበር. በቁጥጥር ቡድን ውስጥ ያሉ እንስሳት "በመተንፈስ" የጨው መፍትሄ (0.9% NaCl).

ለምርጫ ባዮሎጂካል ቁሳቁስእንስሳቱ ሰመመን (ኤተር ማደንዘዣ) ተደርገዋል፣ እና ደም ከተቆረጠ በኋላ ተሰብስቧል። ሴረም በሴንትሪፍግሽን በ 3000 ራፒኤም ለ 15 ደቂቃዎች የተገኘ ሲሆን ለቀጣይ ጥናቶች በ -20 C ተከማችቷል. ፎስፎሊፒድስ፣ ኦክሲስትሮይድ እና ፋቲ አሲድ በደም ሴረም ውስጥ ተተነተነ።

ናሙና ዝግጅት. ከ10-5 ኤም (10 μl በ 1 ml ናሙና) ላይ ለመድረስ የውስጣዊ ደረጃ ፕሮጄስትሮን በደም ሴረም ውስጥ ተጨምሯል። ከዚያም በናሙና ውስጥ የተካተቱትን ፕሮቲኖች ለማፍሰስ እና ስቴሮይድን ለማውጣት ሜታኖል በመጨረሻው 70% (2.33 ሚሊ ሜትር ሜታኖል በ 1 ሚሊር ናሙና) ላይ ተጨምሯል ፣ ከዚያም ለ 15 ደቂቃዎች በ 10,000 ግ. በናሙናው ውስጥ የተካተቱት ፕሮቲኖች ጥቅጥቅ ያለ ደለል ፈጠሩ። የሱፐርኔቱ ንጥረ ነገር ከዝናብ ተለይቷል እና 100 ሚሊ ግራም octadecylsilyl ሲሊካ ጄል በያዘው ቅድመ ሁኔታ በተቀመጠ ጠንካራ ደረጃ ማውጣት (SPE) አምድ ውስጥ አልፏል። የ SPE አምድ 2 ሚሊ ሜትር ሜታኖል፣ 2 ሚሊር ውሃ እና 2 ሚሊር 70% ሜታኖል በተከታታይ በማለፍ ተስተካክሏል። በመጀመሪያ ደረጃ ኮሌስትሮል ፣ በደም ፕላዝማ እና በሌሎች ባዮሎጂያዊ ፈሳሾች ውስጥ ያለው ይዘት በጣም ከፍተኛ ነው ፣ እንዲሁም ሌሎች በርካታ የሃይድሮፎቢክ ቅባቶች ከአምዱ ጋር ይያያዛሉ። ኮሌስትሮል ከተጣበቀ በኋላ, ዓምዱ በ 2 ሚሊ ሜትር 70% ሜታኖል ተጨማሪ ታጥቧል. በናሙናው ውስጥ ከፍተኛ የኮሌስትሮል ይዘት ወይም ትልቅ የናሙና መጠን ካለ ይጠቀሙ

ከፍተኛ የሶርበን ይዘት ያለው የ SPE አምድ ተጠቀምን። ኢሊየቶች ተጣምረው ተነኑ። ትነት በ 50 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ በማይንቀሳቀስ ጋዝ ጅረት ውስጥ ተካሂዷል. ደረቅ ቅሪት በ 500 ሚሊ ሜትር ሜታኖል ውስጥ ይሟሟል እና ለ 10 ደቂቃዎች በ 10,000 ግራም ሴንትሪፉድ. በዚህ ሁኔታ በሜታኖል ውስጥ የማይሟሟ የዋልታ ውህዶች ተዘርግተዋል። የሱፐርኔን ንጥረ ነገር ከደቃው ተለይቷል እና በውሃ የተበጠበጠ ወደ ሚታኖል ክምችት 10% ነው. የተገኘው መፍትሄ በቅድመ-ኮንዲሽነር የ SPE አምድ (2 ሚሊ ሜትር ሜታኖል, 2 ሚሊ ሜትር ውሃ እና 2 ሚሊር 10% ሜታኖል አልፏል) እና በ 2 ሚሊ ሜትር 10% ሜታኖል ታጥቧል. ከአምዱ ጋር የተቆራኙ ስቴሮይድ በ 3 ሚሊር 80% ሜታኖል ተፈትቷል. መፍትሄው ተጥሏል እና ደረቅ ቅሪት በ 100 ሚሊ ሜትር ሜታኖል ውስጥ ይሟሟል. የተገኘው መፍትሄ በ HPLC-MS በመጠቀም ተንትኗል.

የ HPLC ትንተና. ትንታኔው የተካሄደው በ LCQ-Fleet mass spectrometric detector በተገጠመው አኬላ ክሮማቶግራፍ ላይ ነው። መለያየት በ Cosmosil 5C18-MS-II አምድ ላይ በጂኦሜትሪክ መመዘኛዎች 4.6*150 ሚሜ (ናካላይ ቴስክ፣ ጃፓን) ተካሂዷል።

የመለየት መርሃ ግብር (የሟሟ A - ውሃ ፣ ፈሳሽ ቢ - ​​ሜታኖል ፣ የፍሰት መጠን 500 μl / ደቂቃ): ለ 5 ደቂቃ 60% B ፣ 12 ደቂቃ - መስመራዊ ቅልመት 60-95% B ፣ 10 ደቂቃ - 95% B ፣ 8 ደቂቃ - መስመራዊ ቀስ በቀስ 95-100% B, 5 min - 100% B, 5 min - 60% B.

ለጅምላ ስፔክትሮሜትሪክ ትንተና፣ የኬሚካል ionization ምንጭ በ ላይ ጥቅም ላይ ውሏል የከባቢ አየር ግፊት(APCI) Ionization ምንጭ መለኪያዎች፡ የእንፋሎት ሙቀት - 350 ° ሴ, ማድረቂያ ጋዝ ፍሰት - 35 ክፍሎች, ረዳት ጋዝ ፍሰት - 5 አሃዶች, capillary ሙቀት - 275 ° C, capillary ቮልቴጅ - 18 V, ion ሌንስ ቮልቴጅ - 80 V. ጥቅም ላይ የዋለው የውሂብ ጥገኛ™ ቅኝት በፍተሻ ክልል 50-1000 m/z ውስጥ ion ወጥመድን በመጠቀም ሁነታ።

በኬሚካላዊ ionization ሁነታ (ጠቅላላ ion ጅረት) በጅምላ ስፔክትሮሜትሪክ ፈላጊ በመጠቀም የተገኙ ክሮማቶግራሞች የኳል አሳሽ ፕሮግራምን ከXcalibur ጥቅል (ቴርሞ ሳይሲ፣ ዩኤስኤ) በመጠቀም ወደ ጽሑፍ ቅርጸት ተለውጠዋል። የተገኘው መረጃ በስታቲስቲክስ 10 ፓኬጅ ውስጥ የተተገበረውን ዋና አካል ዘዴ እና ለክላስተር ትንተና እና ለዴንድሮግራም ግንባታ መሳሪያዎችን በመጠቀም ነው. የማመሳከሪያው መጽሃፍ የጅምላ እይታን ለመተርጎም እና የግለሰብ ውህዶችን ለመለየት ጥቅም ላይ ውሏል.

ውጤቶች እና ውይይት

ለመላመድ የመጀመርያው ዘዴ ስቴሮይዶችን ከሴረም እና ከደም ፕላዝማ የማውጣት ዘዴ ነበር፣ በማኬሬይ-ናጌል ድፍን ደረጃ ማውጫ መመሪያ ውስጥ የተገለጸው። የመተግበሪያ መመሪያ፣ ጠንካራ ደረጃ የማውጣት ዓምዶችን ለመጠቀም ምክሮችን ይሰጣል። የተስተካከለ የናሙና ዝግጅት ቴክኒክ ከጠንካራ-ደረጃ ማውጣት ጋር ፎስፎሊፒድስን፣ ኦክሲስቴሮይድ እና ቅባት አሲዶችን ከጊኒ አሳማዎች የደም ሴረም ውጤታማ በሆነ መንገድ ለመለየት አስችሏል።

የተገለጸው ክሮማቶግራፊክ መለያየት ቴክኒክ በሴረም ውስጥ የሚገኙትን ሁለቱንም የስቴሮይድ ሆርሞኖችን እና ቅባቶችን በብቃት ለመለየት ያስችላል።

በተገለጹት ዘዴዎች መሰረት ናሙናዎች ተንትነዋል. በስእል. 1 (የሽፋኑን ገጽ 2 ይመልከቱ) ለምሳሌ ፣ ከሙከራ ቡድን 3 ናሙናዎች ትንተና የተገኙ የተደራረቡ ክሮሞግራሞችን ያሳያል ።

ሩዝ. 4. በ 21.5 ደቂቃዎች የማቆየት ጊዜ ያለው ንጥረ ነገር የጅምላ ስፔክት: ሀ - በከባቢ አየር ግፊት ላይ የኬሚካል ionization በአሉታዊ ሁነታ; ለ - የኬሚካል ionization በከባቢ አየር ግፊት በአዎንታዊ ሁነታ.

በቀይ) እና ከቁጥጥር ቡድን (ሰማያዊ) 3 ናሙናዎች. በሌሎች ሁኔታዎች ተመሳሳይ ምስል ታይቷል.

እነዚህን የውሂብ ስብስቦች ለማስኬድ፣ የዋናውን አካል ስልት (PCA) እና የክላስተር ትንታኔን ተጠቅመን፣ ይህም በቁጥጥር እና በሙከራ ቡድኖች መካከል ያለውን የሊፕድ ፕሮፋይል ልዩነት ለመለየት አስችሎታል። የተገኘው የ 1 ኛ እና 2 ኛ ዋና ክፍሎች PCA ሴራ

የውሂብ ልኬት ሲቀንስ, በስእል ውስጥ ይታያል. 2 (ሁለተኛውን የሽፋን ገጽ ይመልከቱ)። በግራፉ ላይ ነጥቦቹ በ 2 ቡድኖች ተጣምረው በ 1 ፣ 4 እና 2 ፣ 3 ፣ በቅደም ተከተል የተተረጎሙ መሆናቸውን መገንዘብ ቀላል ነው። በዚህ ሁኔታ, ከፕሮቶታይፕ ጋር የሚዛመዱ ነጥቦች በአብዛኛው በ 1 ኛ እና 4 ኛ ኳድራንት ውስጥ ይወድቃሉ, ከቁጥጥር ናሙናዎች ጋር የሚዛመዱ ነጥቦች በ 2 ኛ እና 3 ኛ ኳድራንት ውስጥ የተተረጎሙ ናቸው. በማስቀመጥ የተገኘው dendrogram

[ጅብ እና ጽዳት 3/2014

በ chromatogram ውስጥ የሚገኙትን ጫፎች መለየት

የማቆያ ጊዜ፣ ደቂቃ በ"+" ሁነታ ውስጥ ያሉ ዋና ዋና ጫፎች በ"-" ሁነታ ላይ

19,15 393,7 446,8

448,7 493,5 623,4 524,4

19,35 87 227 271 335,5 353,3 371,2 389.1 448.2 493.3 405,4

21,50 316,1 390,0

430.3 448.4 779,1

23,8 319.4 391,6 429.5 783,2

24,35 414,8 448,8

31,73 313,3 330,9

33,9 231.5 245.5 263,3 281,1 295.1 305.2 371.3 521.0 663.1 279,4

ንጥረ ነገር

ፎስፌትዲልኮሊን

አራኪዲክ አሲድ

ፎስፌትዲክ አሲድ 42: 4

Arachidic እና docosate-traenoic አሲዶች

Docosapentaenoic

ሊኖሊክ አሲድ

Dihydroxycholesterol

sternum ትንተና, በስእል ውስጥ ይታያል. 3. ስለዚህ የ chromatographic መረጃ አኃዛዊ ትንታኔ የቁጥጥር እና የሙከራ ቡድኖች አባል በሆኑ የሙከራ እንስሳት ፍጥረታት ውስጥ በሚከሰቱት የሜታብሊክ ሂደቶች ውስጥ ያለውን ልዩነት ያሳያል።

የተወሰኑ የሜታቦሊክ ለውጦችን ለመለየት, የጅምላ ስፔክተሮች ተገለጡ እና ተለይተዋል.

የግለሰብ ግንኙነቶች ተገልጸዋል (ሰንጠረዡን ይመልከቱ). የናሙና መጠኑ ለመተንተን በቂ አይደለም እና በሴረም ውስጥ የስቴሮይድ ሆርሞን መገለጫ ለውጦችን እንድናውቅ አልፈቀደልንም። ይሁን እንጂ በ chromatogram ውስጥ መካከለኛ ፖላሪቲ ያላቸው ቅባቶች ተገኝተዋል.

በተለያዩ ionization ሁነታዎች የተመዘገቡትን የንጥረ ነገሮች ብዛት በመተንተን የግለሰብ ውህዶች ተለይተዋል። ስለዚህ የንብረቱ የጅምላ ስፔክትረም በሁለት ionization ሁነታዎች ከ 21.5 ደቂቃ የማቆያ ጊዜ ጋር በስእል ውስጥ ቀርቧል. 4. የዚህ ስፔክትረም ትንታኔ እንደሚያሳየው ንጥረ ነገሩ diacyl-sn-glycerophosphate ጋር ነው። ሞለኪውላዊ ክብደት 780 (R1 (311) = 20:0 fatty acid (arachidic acid), R2 (331) = 22:4 fatty acid (docosatetraenoic acid)).

የ 42.52 ደቂቃ የማቆያ ጊዜ ያለው የክሮሞቶግራፊ ጫፍ ከዲይሃይድሮክሲኮልስትሮል ጋር እንደሚዛመድ ተረጋግጧል, ምናልባትም የቢል አሲድ ባዮሲንተሲስ ውስጥ ካሉት ቅድመ ሁኔታዎች ውስጥ አንዱ ነው. በደም ሴረም ውስጥ ያለው የኦክሲስቴሮይድ ይዘት ልዩነት በቢል አሲድ ሜታቦሊዝም ውስጥ ሊከሰት የሚችል ችግርን ያሳያል። በ chromatograms ውስጥ በስእል ውስጥ የቀረቡትን ልብ ሊባል ይችላል. 1, በሙከራ እንስሳት የደም ሴረም ውስጥ ከቁጥጥር ጋር ሲነፃፀር የኦክስጅን መጠን መጨመር (ከ 35-45 ደቂቃዎች የመቆያ ጊዜ ከፍተኛ ነው).

መደምደሚያ. በስራው ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው ቴክኒክ በከፍተኛ ደረጃ ቅልጥፍና ለአካባቢ ብክለት ሲጋለጥ የሊፕዲድ ሜታቦሊዝም መዛባትን ለመለየት ያስችላል። የተገኘው ውጤት እንደሚያመለክተው ለሙከራ የካቪያ ፖርሴልስ እንስሳት የጨው የውሃ መፍትሄዎች በአፍንጫ ውስጥ መሰጠት በሊፒዲድ እና ኦክሲስቴሮይድ ልውውጥ ላይ ለውጥ ያስከትላል ። በተለይም በእንስሳት ውስጥ የታዩት የቢል አሲድ ፕሪኩሰርስ (ሃይድሮክሲስተሮይድ) መጠን ከጉበት እና በቢሊ አሲድ ባዮሲንተሲስ ውስጥ ከሚሳተፉ ኢንዛይሞች ጋር የተቆራኘ ሊሆን ይችላል። ስለዚህ የተገለጸው አካሄድ የቴክኖሎጂ ብክለት ባለባቸው ክልሎች ነዋሪዎች ላይ የሊፕዲድ ሜታቦሊዝም መዛባትን ለመለየት ያስችላል።

ስነ-ጽሁፍ

1. ሆርኒንግ ኢ.ሲ., ሆርኒንግ ኤም.ጂ. ሜታቦሊክ መገለጫዎች-የጋዝ-ደረጃ ዘዴዎች ሜታቦሊዝምን ለመተንተን። ክሊን ኬም. 1971; 17(8)፡ 802-9።

2. ቆስጠንጢኖው ኤም.ኤ., Tsantili-Kakoulidou A., Andreadou I., Iliodro-mitis E.K., Kremastinos D.T., Mikros E. በ NMR ላይ የተመሰረተ ሜታቦኖሚክስ በ myocardial ischemia-reperfusion, ischemic preconditioning እና ጥንቸሎች ውስጥ የፀረ-ሙቀት አማቂያን ምርመራ. ኢሮ. ጄ. ፋርም ሳይ. 2007; 30 (3-4)፡ 303-14።

3. Lu W., Bennett B.D., Rabinowitz J.D. በኤልሲ-ኤምኤስ ላይ የተመሰረቱ የሜታቦሎሚክስ ትንታኔ ስልቶች። ጄ. Chromatogr. B.Analyt. ቴክኖል ባዮሜድ የህይወት ሳይንስ. 2008; 871 (2)፡ 236-42።

4. Novotny M.V., Soini H.A., Mechref Y. ባዮኬሚካላዊ ግለሰባዊነት በ chromatographic, electrophoretic እና mass-spectro-metric መገለጫዎች ውስጥ ይንጸባረቃል. ጄ. Chromatogr. B.Analyt. ቴክኖል ባዮሜድ የህይወት ሳይንስ. 2008; 866 (1-2)፡ 26-47።

5. ጀርመናዊው ጄ.ቢ., ጊሊስ ኤል.ኤ., ስሚሎዊትዝ ጄት, ዚቭኮቪች ኤ.ኤም., ዋትኪንስ ኤስ.ኤም. በሜታቦሎሚክስ ውስጥ የሊፒዲሞሚክስ እና የሊፒድ ፕሮፋይል. Curr አስተያየት ሊፒዶል. 2007; 18(1)፡ 66-71።

6. Schwarz E., Liu A., Randall H., Haslip C., Keune F., Murray M. et al. በ UPLC-MS/MS የስቴሮይድ መገለጫን እንደ ሁለተኛ ደረጃ ፈተና አዲስ ለተወለደ አድሬናል ሃይፐርፕላዝያ ምርመራ ማድረግ፡ የዩታ ተሞክሮ። ፔዲያተር ሬስ. 2009; 66(2)፡ 230-5።

7. Rauh M. ስቴሮይድ መለኪያ ከ LC-MS / MS ጋር. መተግበሪያ

ወደ አርት. Chakhovsky እና ሌሎች.

ሩዝ. 3. Dendrogram በክላስተር ትንተና ላይ የተገነባ እና የናሙናዎችን ስብስብ በቡድን በማሳየት ላይ።

ወደ አርት. Chakhovsky እና ሌሎች.

ሩዝ. 1. የተዋሃዱ ክሮሞግራም ናሙናዎች 1-3 ከቁጥጥር ቡድን (በቀይ የደመቀው) እና 15-17 ከሙከራ ቡድን (በሰማያዊ የደመቁ)።

በፋክታር-አውሮፕላን ላይ ያሉ ጉዳዮች ትንበያ (1 x 2) ጉዳዮች የኮሳይን ካሬ ድምር >= 0.00

18/3 9/ዝ 21/1 ■ ኦ

1 ብድር "Sh o 28/1" 22/10 41/1 p

ምክንያት 1፡ 65.71%

ሩዝ. 2. ፒሲኤ በመጠቀም ክሮሞግራም በማዘጋጀት የተገኘ ግራፍ። የቁጥጥር ቡድኑ በሰማያዊ፣ የሙከራ ቡድን በቀይ ጎልቶ ይታያል።

በክሊኒካል ባዮኬሚስት ክለሳዎች ላይ የታተመ ግምገማ እንደሚያሳየው ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ከታንደም mass spectrometry (HPLC-MS/MS) ጋር በክሊኒካዊ ላቦራቶሪዎች ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው ባለፉት 10 እና 12 ዓመታት በከፍተኛ ደረጃ ጨምሯል። ደራሲዎቹ ዝቅተኛ ሞለኪውላዊ ክብደት ሞለኪውሎች ለመተንተን የ HPLC-MS/MS ትንተና ልዩነት ከበሽታ መከላከያ ዘዴዎች እና ክላሲካል ከፍተኛ አፈፃፀም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (HPLC) በእጅጉ የላቀ መሆኑን እና ከጋዝ ክሮማቶግራፊ-ጅምላ ስፔክትሮሜትሪ (ጂሲሲ) የበለጠ ከፍተኛ ፍሰት እንዳለው አስተውለዋል ። -ወይዘሪት). በተለመደው ክሊኒካዊ ትንታኔዎች ውስጥ የዚህ ዘዴ ተወዳጅነት በአሁኑ ጊዜ በልዩ ችሎታዎች ተብራርቷል.

የ HPLC-MS/MS ዘዴ ዋና ጥቅሞች፡-
• የትናንሽ ሞለኪውሎች ትክክለኛ የቁጥር ትንተና እድል;
• የበርካታ ዒላማ ውህዶች በአንድ ጊዜ ትንተና;
• ልዩ ልዩነት;
• ከፍተኛ የመተንተን ፍጥነት.

ውስጥ ያለፉት ዓመታትለመተንተን ጊዜ እና በውጤቱም, የላብራቶሪ ምርታማነትን ለመጨመር ብዙ ትኩረት ይሰጣል. የትንተና ጊዜን በከፍተኛ ሁኔታ መቀነስ የሚቻለው ለ HPLC/MS/MS አጭር የትንታኔ አምዶችን በመጠቀም ሲሆን የትንታኔውን ልዩነት በከፍተኛ ደረጃ ይጨምራል። የከባቢ አየር ግፊት ionization (ኤፒአይ)፣ የታንዳም ሶስት እጥፍ ባለአራት ጅምላ ስፔክትሮሜትር እና የላቀ ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ እንዲሁም ተያያዥነት ያላቸው የናሙና ዝግጅት ቴክኒኮችን መጠቀም HPLC-MS/MS በዘመናዊ የትንታኔ ዘዴዎች ለክሊኒካዊ ምርምር ግንባር ቀደም አድርጎታል።

በክሊኒካዊ ሕክምና ውስጥ የ HPLC/MS/MS አተገባበር ዋና ቦታዎች፡-
• የስቴሮይድ ፓነሎች ፣ ፕዩሪን እና ፒሪሚዲን እና ሌሎች ውህዶች የተሟላ የሜታቦሊክ ፕሮፋይል ማግኘት ፣
  አዲስ የተወለዱ ሕፃናትን በሜታቦሊዝም ውስጥ ለተወለዱ ስህተቶች መመርመር (በአንድ ሙከራ ውስጥ በርካታ ደርዘን በሽታዎችን መለየት);
• የመድኃኒት ቴራፒዩቲካል ክትትል - የበሽታ መከላከያ መድሃኒቶች, ፔሮቲኮንቫልሰንት, ፀረ-ኤችአይቪ, ፀረ-የደም መፍሰስ እና ሌሎች - የአምራች እቃዎች መገኘት ምንም ይሁን ምን. ለእያንዳንዱ ንጥረ ነገር ውድ ዕቃዎችን መግዛት አያስፈልግም - የራስዎን ዘዴዎች ማዳበር ይችላሉ;
• ክሊኒካዊ ቶክሲኮሎጂ - ከ 500 በላይ የናርኮቲክ ውህዶች እና የእነሱ ሜታቦሊዝም ትንተና በአንድ ትንታኔ ፣ ያለ ማረጋገጫ ትንታኔ።
  ፕሮቲዮሚክስ እና ሜታቦሎሚክስ.

በተጨማሪም, HPLC-MSMS የሽንት ኦሊጎሳካራይድ, ሰልፋይድ, ረዥም ሰንሰለት ለማጣራት ያገለግላል. ቅባት አሲዶች, ረጅም ሰንሰለት ይዛወርና አሲዶች, methylmalonic አሲድ, porphyria ላይ ምርምር, የፕዩሪን እና pyrimidine ተፈጭቶ መታወክ ጋር በሽተኞች የማጣሪያ.

ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ የመተግበሪያ ምሳሌዎች
በክሊኒካዊ ትንታኔዎች ውስጥ ከታንደም mass spectrometry ጋር በማጣመር.

አዲስ የተወለደውን ምርመራ;በክሊኒካዊ ምርመራዎች ውስጥ የ HPLC-MS/MS በስፋት ጥቅም ላይ የዋለው የመጀመሪያው ምሳሌ በአራስ ሕፃናት ውስጥ የተወለዱ ሜታቦሊዝም ስህተቶችን መመርመር ነው። በአሁኑ ጊዜ በበለጸጉ አገሮች ውስጥ ይህ የተለመደ ዘዴ ሲሆን ከ 30 በላይ የተለያዩ በሽታዎችን ይሸፍናል, እነዚህም አሲዴሚያ, አሚኖአሲዶፓቲ እና የፋቲ አሲድ ኦክሳይድ ጉድለቶችን ያጠቃልላል. በተለይ በአፋጣኝ መፍትሄ ካልተሰጠ ወደ ከባድ ችግር ሊመሩ የሚችሉ (ለምሳሌ የልብ ወይም የጉበት እብጠት ወይም የአንጎል እብጠት) የተወለዱ ጉድለቶች ጥናቶች ናቸው። ኤች.ፒ.ኤል.ሲ-ኤምኤስ/ኤምኤስ ለአራስ ግልጋሎት የመጠቀም ጥቅሙ ሁሉንም አሚኖ አሲዶች እና አሲሊካርኒቲኖችን በፍጥነት፣ ርካሽ እና ልዩ በሆነ መልኩ በአንድ ጊዜ የመተንተን ችሎታ ነው።

የመድኃኒት ሕክምና ክትትል;የ HPLC-MS/MS ወደ ክሊኒካዊ ላቦራቶሪዎች ለማስተዋወቅ ከዋና ዋና አንቀሳቃሾች አንዱ የሆነው የበሽታ መከላከያ መድሃኒት ሲሮሊመስ (ራፓሚሲን) ከተከላ በኋላ የአካል ክፍሎችን አለመቀበልን ለመከላከል ነው። ዘመናዊ ዘዴኤችፒኤልሲ-ኤምኤስ/ኤምኤስ ታክሮሊመስን፣ ሲሮሊሙስን፣ ሳይክሎፖሪንን፣ ኢቬሎሊመስን እና ማይኮፊኖይክ አሲድን በአንድ ጊዜ ለመወሰን ያስችላል።

HPLC-MS/MS ለሳይቶቶክሲክ፣ ለፀረ-ኤችአይቪ መድሃኒቶች፣ ትሪሳይክሊክ ፀረ-ጭንቀቶች፣ ፀረ-ቁስሎች እና ሌሎች የግለሰቦችን መጠን የሚጠይቁ መድኃኒቶችን ለመተንተን ያገለግላል።

የ HPLC-MSMS ዘዴ በ 0.1-500 ng/ml ውስጥ ባለው የ R- እና S-enantiomers of warfarin መለየት እና መጠን መለየት ያስችላል.

የአደንዛዥ ዕፅ እና የህመም ማስታገሻዎች; HPLC-MS/MS ለናሙና ዝግጅት ቀላልነት እና ለአጭር ጊዜ የትንተና ጊዜ በመሆኑ ለእነዚህ ውህዶች ትንተና በስፋት ጥቅም ላይ ይውላል። ዘዴው በአሁኑ ጊዜ በክሊኒካዊ ላቦራቶሪዎች ውስጥ ብዙ ዓይነት መድኃኒቶችን መኖሩን ለማጣራት ያገለግላል. የስልቱ ልዩ ልዩነት እና ስሜታዊነት በአንድ ናሙና ውስጥ ከ 500 በላይ የተለያዩ ክፍሎችን በትንሽ ናሙና ዝግጅት በአንድ ጊዜ ለመተንተን ያስችላል። ስለዚህ የሽንት ምርመራን በተመለከተ ናሙናውን በ 50-100 ጊዜ ቀለል ያለ ማቅለጥ በቂ ነው. ፀጉርን በሚመረምርበት ጊዜ ከ100-200 ፀጉሮች ስብስብ ፋንታ አንድ ፀጉር የአደንዛዥ ዕፅ አጠቃቀምን እውነታዎች በአስተማማኝ ሁኔታ ለመለየት በቂ ነው።

ኢንዶክሪኖሎጂ እና ስቴሮይድ ትንታኔ; HPLC-MS/MS ስቴሮይድ - ቴስቶስትሮን, ኮርቲሶል, aldesterone, ፕሮጄስትሮን, estriol እና ሌሎች በርካታ ትንተና ለማግኘት በብዙ ኢንዶክሪኖሎጂ ላቦራቶሪዎች ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል.

የቫይታሚን D3 እና D2 የደም ደረጃዎችን ለመወሰን ኤች.ፒ.ኤል.ሲ-ኤምኤስ/ኤምኤስን መጠቀም እየጀመሩ ነው።

I. የስቴሮይድ (የስቴሮይድ ፕሮፋይል) መወሰን.

የሆስፒታል እና የክሊኒክ ላቦራቶሪዎች HPLC/MS/MS በመጠቀም የበርካታ ስቴሮይድ መድኃኒቶችን በአንድ ጊዜ የመወሰን ችሎታ አላቸው። በዚህ ሁኔታ, ትልቅ የናሙና መጠን አያስፈልግም, በተለይም የሕፃናት ናሙናዎችን ሲተነተን በጣም አስፈላጊ ነው.

በርካታ (መገለጫ) ስቴሮይዶችን ለመወሰን የሚመከርባቸው ጉዳዮች፡-
• Congenital adrenal hyperplasia (CAH) በስቴሮይድ ባዮሲንተሲስ ውስጥ የተወለደ ጉድለት ነው. ይህ በአድሬናል ኮርቴክስ ውስጥ ኢንዛይሞች ተገቢ ባልሆነ እንቅስቃሴ ምክንያት የሚመጡ የበሽታዎች በዘር የሚተላለፍ ቡድን ነው ፣ ይህም የኮርቲሶል ምርትን ቀንሷል። ለ NAS አስተማማኝ ምርመራ, ኮርቲሶል, አንድሮስተኔዲዮን እና 17-hydroxyprogesterone ለመለካት ይመከራል. ኤችፒኤልሲ/ኤምኤስ/ኤምኤስ 100% በራስ መተማመን ሦስቱንም ስቴሮይዶች በአንድ ትንታኔ ውስጥ በትክክል መለካትን ይፈቅዳል።
• የበሽታ መከላከያ ምርመራዎችን በመጠቀም አዲስ የተወለዱ ሕጻናት መደበኛ ምርመራ በከፍተኛ መጠን አዎንታዊ እና የውሸት አሉታዊ ውጤቶች ይገለጻል. በ HPLC/MS/MS የኮርቲሶል ብቻ ሳይሆን አልዶስተሮን እና 11-ዲኦክሲኮርቲሶል መወሰኑ አንደኛ ደረጃን ከሁለተኛ ደረጃ የአድሬናል እጥረት ለመለየት ያስችላል።
• ኤች.ፒ.ኤል.ሲ/ኤምኤስ/ኤምኤስ በፕሮስቴትተስ እና ሥር የሰደደ የፔልቪክ ሕመም ሲንድረም ውስጥ ስቴሮይድ ን ለመወሰን ያስችላል።
• HPLC-MS/MS የስቴሮይድ መገለጫዎችን ሊወስን እና በትናንሽ ልጆች ውስጥ ከአድሬናል ኮርቴክስ ጋር የተያያዘ ቅድመ ጉርምስና መንስኤዎችን መለየት ይችላል። በእነዚህ ልጆች ውስጥ ያለው የቴስቶስትሮን፣ አንድሮስተኔዲዮን፣ ዲኤይድሮኢፒአንድሮስተሮን (DHEA) እና ሰልፌት መጠኑ በዕድሜ ከሚቆጣጠሩ ሕፃናት በትንሹ ከፍ ያለ ሆኖ ተገኝቷል።
• ከንቁ አጫሾች፣ ተገብሮ አጫሾች እና የማያጨሱ ሴረም 15 ስቴሮይድ ሆርሞኖች እና ታይሮይድ ሆርሞኖች በመኖራቸው በታካሚ ጭስ መጋለጥ እና በሆርሞን ክምችት መካከል ያለውን ግንኙነት ለመመርመር ይተነተናል።
• ኤች.ፒ.ኤል.ሲ/ኤምኤስ/ኤምኤስ በሽንት ውስጥ ባሉ አንዳንድ የሴት ስቴሮይድ ሆርሞኖች መገለጫ ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላል።
• ኤችፒኤልሲ/ኤምኤስ/ኤምኤስ የስኳር በሽታ ነርቭ በሽታን ለመከላከል የኒውሮአክቲቭ ሆርሞኖችን መጠን ለመገምገም ጥቅም ላይ ውሏል።

II. የታይሮይድ ሆርሞኖችን መወሰን

የታይሮይድ ሆርሞኖችን ለመወሰን መደበኛ ዘዴዎች ብዙውን ጊዜ በሬዲዮኢሚውኖአሲስ ላይ የተመሰረቱ ናቸው, ይህም ውድ እና T3 እና T4 ብቻ ነው, ይህም የታይሮይድ ተግባርን የመወሰን እና ሙሉ በሙሉ የመቆጣጠር ችሎታን ሊገድብ ይችላል.

• በአሁኑ ጊዜ, HPLC-MSMS በመጠቀም, ታይሮክሲን (T4), 3,3′,5-triiodothyronine (T3), 3,3′,5′- (rT3) ጨምሮ, የሴረም ናሙናዎች ውስጥ አምስት ታይሮይድ ሆርሞኖች በአንድ ጊዜ ትንተና ይካሄዳል. , 3,3'-diiodothyronine (3,3'-T2) እና 3,5-diiodothyronine (3,5-T2) በማጎሪያ ክልል 1 -500 ng / ml.
• የኤች.ፒ.ኤል.ሲ/ኤምኤስ/ኤምኤስ ዘዴ በተጨማሪም ታይሮይዲክሞሚ በተደረገላቸው ታካሚዎች ላይ የሆርሞኖችን ስብጥር ለመተንተን ይጠቅማል። ከቀዶ ጥገናው በኋላ የታይሮክሲን (T4) ፣ ትሪዮዶታይሮኒን (T3) ፣ ነፃ ቲ 4 እና ታይሮይድ አነቃቂ ሆርሞን (TSH) ትኩረት ይወሰናል። HPLC/MS/MS በቲኤስኤች እና በታይሮይድ ሆርሞኖች ክምችት መካከል ያለውን ግንኙነት ለመመስረት ጥሩ መንገድ ሆኖ ተገኝቷል።
• የ HPLC/MS/MS ዘዴ በሰው ምራቅ እና ሴረም ውስጥ ታይሮክሲን (T4) ለመወሰን ጥቅም ላይ ውሏል። ዘዴው በከፍተኛ ድግግሞሽ, ትክክለኛነት እና የ 25 pg / ml የመለየት ገደብ ተለይቶ ይታወቃል. ጥናቶች እንደሚያሳዩት በምራቅ ቲ 4 ክምችት ውስጥ በ euthyroid ርእሶች እና በግራቭስ በሽታ በተያዙ ታካሚዎች መካከል የመመርመሪያ ግንኙነት አለ.

የ HPLC/MS/MS ዘዴ አሁን ሁሉንም ስቴሮይዶች በባዮሎጂካል ፈሳሾች ውስጥ በአስተማማኝ ሁኔታ ለመወሰን የሚያስፈልገው ስሜታዊነት፣ ልዩነት እና ትክክለኛነት ስላለው የመመርመሪያ አቅምን ያሻሽላል በተለይም የስቴሮይድ ስብስቦችን በሚወስኑበት ጊዜ።

III. የ 25-hydroxyvitamin D በ HPLC/MS/MS መወሰን

25-hydroxy ቫይታሚን D (25OD) ዋናው የቫይታሚን ዲ ዝውውር እና የነቃ ቅርጹ ቀዳሚ ነው። (1,25-dihydroxyvitamin D). በረጅም ግማሽ ህይወት ምክንያት የ 25OD ውሳኔ በታካሚው አካል ውስጥ ያለውን የቫይታሚን ዲ ሁኔታ ለመወሰን አስፈላጊ ነው. ቫይታሚን ዲ በሁለት መልክ ይገኛል፡ ቫይታሚን D3 (cholecalciferol) እና ቫይታሚን D2 (ergocalciferol)። ሁለቱም ቅጾች በየራሳቸው 25OD ቅርጾች ተፈጭተዋል። ለምርመራው ትልቅ ጠቀሜታ ሁለቱንም የቫይታሚን ዓይነቶች በከፍተኛ ትክክለኛነት የሚወስኑ እና የቫይታሚን ዲ እጥረት ያለባቸውን ታማሚዎች ለመቆጣጠር የሚያስችሉ የትንታኔ ዘዴዎች መኖራቸው ነው ። እስካሁን ጥቅም ላይ የዋሉት ዘዴዎች የቫይታሚን D2 እና D3 ን ለመለየት አልፈቀዱም ። በተጨማሪም, በከፍተኛ የቫይታሚን D2 ክምችት, ሊታወቅ የሚችለው የ D3 መጠን ዝቅተኛ ነው. ሌላው ጉዳት የራዲዮአክቲቭ isotopes አጠቃቀም ነው። የ HPLC/MS/MS ዘዴን መጠቀም ሬዲዮአክቲቭ ኢሶቶፖችን ከመጠቀም መቆጠብ ብቻ ሳይሆን የሁለቱም ንቁ የቫይታሚን ዓይነቶች የተለየ ውሳኔ እንዲደረግ አስችሏል።

ዘዴው ለሚከተሉት ታካሚዎች ተግባራዊ ይሆናል.
1. በሰውነት ውስጥ የቫይታሚን ዲ ዝቅተኛ ደረጃ ከጠረጠሩ;
2. የማይታወቅ መርዛማነት ከተጠረጠረ;
3. ለዝቅተኛ የቫይታሚን ዲ ደረጃዎች ሕክምና የሚወስዱ ታካሚዎችን ሲመረምሩ;
4. የ HPLC/MS/MS አጠቃቀም በሽተኞችን በሚቆጣጠርበት ጊዜ ሁለቱንም ቅጾች በተናጥል ለመወሰን ተፈቅዷል።

IV. የበሽታ መከላከያ መድሃኒቶችን በ HPLC / MS / MS መወሰን

የአካል ክፍሎች ከተቀየረ በኋላ, አለመቀበልን ለማስወገድ የበሽታ መከላከያ መድሃኒቶች ለህይወት መወሰድ አለባቸው. በጣም ጠባብ በሆነ የሕክምና ክልል እና ከፍተኛ መርዛማነት, የበሽታ መከላከያ መድሃኒቶች ከፍተኛውን ውጤት ለማግኘት የግለሰብ መጠን ያስፈልጋቸዋል. ስለዚህ ዋና ዋና የበሽታ መከላከያ መድሃኒቶችን መከታተል-ሳይክሎፖሮን ኤ, ታክሮሊመስ, ሲሮሊሙስ እና ኤቭሮሊሙስ ለእያንዳንዱ በሽተኛ በደም ውስጥ ባለው የመድኃኒት መጠን ላይ በመመርኮዝ የመድኃኒቱን መጠን ለማስተካከል በጣም አስፈላጊ ነው።

Immunoassays አሁንም እነዚህን መድሃኒቶች ለመከታተል ጥቅም ላይ ይውላሉ, ነገር ግን እነዚህ ዘዴዎች ውድ ናቸው እና የተወሰነ ልዩነት, ትክክለኛነት እና የመራባት ችሎታ አላቸው. የበሽታ መከላከያ ዘዴዎችን በመጠቀም በተገኘው ውጤት ላይ በመመርኮዝ የበሽታ መከላከያ መድሃኒቶች ትክክለኛ ያልሆነ መጠን የታካሚዎች ሞት ጉዳዮች አሉ። በአሁኑ ጊዜ የበሽታ መከላከያ ምርመራዎች በ HPLC/MS/MS በክሊኒካል ላቦራቶሪዎች እየተተኩ ናቸው። ስለዚህ በሙኒክ ዩኒቨርሲቲ ክሊኒክ በየቀኑ 70 የሚጠጉ ናሙናዎች የ HPLC/MS/MS ስርዓትን በመጠቀም ለ sirolimus እና cyclosporin A ይዘት ይመረመራሉ። ሁሉም የናሙና ዝግጅት እና የመሳሪያ ቁጥጥር በአንድ ሰራተኛ ይከናወናል. ላቦራቶሪው ይህንን ዘዴ በመጠቀም ወደ ታክሮሊመስ መፈተሽም እየተቀየረ ነው።

• የ HPLC/MS/MS አጠቃቀም ታክሮሊመስ፣ሲሮሊመስ፣አስኮምይሲን፣ዴሜቲክሲሲሮሊሙስ፣ሳይክሎፖሮን ኤ እና ሳይክሎፖሮን ጂ በደም ውስጥ በአንድ ጊዜ በአንድ ጊዜ ለመወሰን ይገለጻል። በማጎሪያው የሚወሰነው ክልል 1.0 - 80.0 ng / ml ነው. ለ cyclosporine 25 - 2000 ng / ml. በዓመቱ ውስጥ, ላቦራቶሪው ከ 50,000 በላይ ናሙናዎችን ተንትኗል.
• ታክሮሊመስ እና ሲሮሊመስ በአንድ ጊዜ ጥቅም ላይ መዋላቸው አወንታዊ የሕክምና ውጤት እንዳለው ስለተገኘ ለክሊኒካዊ ትንታኔ በደም ውስጥ ያለውን የተለየ ለመወሰን ቀላል እና ውጤታማ የሆነ የ HPLC/MS/MS ዘዴ ተዘጋጅቷል። የአንድ ናሙና ትንተና 2.5 ደቂቃ ይወስዳል ከትክክለኛነት ከ 2.46% - 7.04% ለ tacrolimus እና 5.22% - 8.30% ለ sirolimus ለጠቅላላው የትንታኔ ኩርባ። ለ tacrolimus ዝቅተኛ የመለየት ገደብ 0.52 ng / ml, ለ sirolimus - 0.47 ng / ml.

V. የሆሞሳይስቴይን ውሳኔ በ HPLC/MS/MS

Homocysteine ​​የልብና የደም ቧንቧ በሽታዎች (thromboembolism, የልብ በሽታ, አተሮስክለሮሲስ) እና ሌሎች ክሊኒካዊ ሁኔታዎች (የመንፈስ ጭንቀት, የአልዛይመርስ በሽታ, ኦስቲዮፖሮሲስ, የእርግዝና ችግሮች, ወዘተ) ላይ ፍላጎት አለው. የበሽታ መከላከያዎችን ጨምሮ ለሆሞሳይስቴይን ትንተና ወቅታዊ ዘዴዎች ውድ ናቸው. ለሆሞሳይስቴይን ትንተና ፈጣን የ HPLC/MS/MS ዘዴ ብዙ ቁጥር ያላቸውን ናሙናዎች ለመተንተን ለወትሮው ክሊኒካዊ አጠቃቀም ተዘጋጅቷል። ionization የተካሄደው በኤሌክትሮስፕሬይ ዘዴ ነው. ዘዴው ሊባዛ የሚችል, በጣም ልዩ እና ትክክለኛ ነው. የዚህ ዘዴ ጥቅሞች የሪኤጀንቶች ዝቅተኛ ዋጋ እና የናሙና ዝግጅት ቀላልነት ናቸው. በቀን 500 ወይም ከዚያ በላይ ናሙናዎችን መተንተን ይቻላል.

ማጠቃለያ

ምንም እንኳን በአሁኑ ጊዜ በከፍተኛ ሁኔታ የተሻሻሉ የበሽታ መከላከያ ዘዴዎች ጥቅም ላይ ቢውሉም, በቴክኒካዊ መሰረታዊ ገደቦች ምክንያት, ይህ ዘዴ ከ HPLC-MSMS ጋር የሚወዳደር ለታለመው ንጥረ ነገር ትክክለኛነት እና ልዩነት ፈጽሞ እንደማይኖረው ልብ ሊባል ይገባል, በተለይም በሜታቦሊዝም ውስጥ. ይህ የ ELISA ዘዴን ዝቅተኛ ትክክለኛነት እና ከፍተኛ መቶኛ የውሸት አወንታዊ እና የውሸት አሉታዊ ውጤቶችን ብቻ ሳይሆን የ ELISA ዘዴን በመጠቀም በተለያዩ ክሊኒካዊ ክፍሎች ውስጥ የተገኘውን ውጤት ማወዳደር አይፈቅድም. የ HPLC-MS/MS አጠቃቀም ይህንን ችግር ያስወግዳል እና በከፍተኛ ደረጃ ልዩ ፣ ትክክለኛ እና ፈጣን ትንታኔዎችን በከፍተኛ ደረጃ ለመመርመር ያስችላል ። የታካሚዎች.

እንደሚታየው የመሳሪያው ውስብስብ ከፍተኛ ዋጋ ቢታይም የዓለም ልምምድ, በተገቢው አሠራር, ይህ ውስብስብ በ 1-2 ዓመታት ውስጥ ይከፍላል. ይህ የሚከሰተው በመጀመሪያ ደረጃ የአንድ ትንታኔ ዝቅተኛ ዋጋ በአስር እና በመቶዎች የሚቆጠሩ ውህዶች በአንድ ጊዜ በመተንተን እና ውድ የሆኑ የመመርመሪያ መሳሪያዎችን የመግዛት አስፈላጊነት ባለመኖሩ ነው። በተጨማሪም ላቦራቶሪ ማንኛውንም አስፈላጊ የትንታኔ ዘዴዎችን በተናጥል ለማዘጋጀት እና በኪት አምራቹ ላይ የተመካ አይደለም.

ትክክለኛውን የመሳሪያ ውቅር መምረጥ

ብዙ ቁጥር ያላቸው የተለያዩ የጅምላ ስፔክትሮሜትሪ ዘዴዎች እና የተለያዩ ችግሮችን ለመፍታት የተነደፉ የጅምላ ስፔክትሮሜትር ዓይነቶች አሉ - በመቶ ሺዎች የሚቆጠሩ ዳልተን የሚመዝኑ ውስብስብ የፕሮቲን ማክሮ ሞለኪውሎች መዋቅራዊ መለያ እስከ ትናንሽ ሞለኪውሎች ከፍተኛ-ግኝት መጠናዊ ትንተና ድረስ።

ለ የተሳካ መፍትሄተግባሩን ከተሰጠ, ከዋና ዋና ሁኔታዎች ውስጥ አንዱ ትክክለኛው የመሳሪያ ዓይነት ምርጫ ነው. አጠቃላይ የትንታኔ ችግሮችን ለመፍታት የሚያስችል ሁለንተናዊ መሳሪያ የለም። ስለዚህ ረቂቅ ተሕዋስያንን የመለየት ችግርን ለመፍታት የተነደፈው መሣሪያ ስለ ትናንሽ ሞለኪውሎች መጠናዊ ትንተና ማድረግ አይችልም። እንዲሁም በተቃራኒው. ነጥቡ ቢሆንም የጋራ ስም, እነዚህ በተለያዩ የአካል መርሆዎች ላይ የሚሰሩ ሙሉ ለሙሉ የተለያዩ መሳሪያዎች ናቸው. በመጀመሪያው ሁኔታ, ይህ በሌዘር ionization ምንጭ - ማልዲ-TOF, እና ሁለተኛው - electrospray ionization ጋር ሶስቴ ባለአራት - HPLC-MSMS ጋር ጊዜ-የበረራ የጅምላ spectrometer ነው.

ሁለተኛው በጣም አስፈላጊው መለኪያ ትክክለኛውን የስርዓት ውቅር መምረጥ ነው. የጅምላ ስፔክትሮሜትሪ መሳሪያዎች በርካታ ዋና አምራቾች አሉ. የእያንዲንደ አምራች መሳሪያዎች የራሳቸው ጥንካሬዎች ብቻ ሳይሆን ድክመቶችም አሏቸው, እነሱ በአብዛኛው ዝምታን ይመርጣሉ. እያንዳንዱ አምራች የራሱን የመሳሪያ መስመር ያመርታል. የአንድ ትንታኔ ውስብስብ ዋጋ ከ100,000 እስከ 1,000,000 ወይም ከዚያ በላይ ዶላር ይደርሳል። ጥሩውን አምራች እና ትክክለኛው የመሳሪያ ውቅር መምረጥ ከፍተኛ የገንዘብ ሀብቶችን መቆጠብ ብቻ ሳይሆን ስራውን በብቃት ይፈታል. በሚያሳዝን ሁኔታ, እነዚህን ነገሮች ግምት ውስጥ ሳያስገባ የላብራቶሪ መሳሪያዎች የተካሄዱባቸው ብዙ ምሳሌዎች አሉ. ውጤቱ ስራ ፈት መሳሪያዎች እና የተበላሸ ገንዘብ ነው.

የላብራቶሪውን ስኬታማ ሥራ የሚወስነው ሦስተኛው ነገር የሰው ኃይል ነው። የጅምላ ስፔክትሮሜትሮችን ለመሥራት ከፍተኛ ብቃት ያላቸውን ባለሙያዎችን ይፈልጋል። እንደ አለመታደል ሆኖ በሩሲያ ውስጥ አንድ ዩኒቨርሲቲ በተለይ ከክሊኒካዊ አፕሊኬሽኖች ጋር በተገናኘ በዘመናዊ ተግባራዊ የጅምላ ስፔክትሮሜትሪ ትምህርት የለም እና በእያንዳንዱ ላቦራቶሪ ውስጥ ያሉ ሰራተኞችን የማሰልጠን ተግባራት በራሳቸው መፍታት አለባቸው ። በተፈጥሮ መሳሪያው ከተጀመረ በኋላ በአምራቹ የሚካሄደው የ2-3 ቀናት የመግቢያ ስልጠና የስልቱን መሰረታዊ ነገሮች ለመረዳት እና መሳሪያውን የማስኬድ ችሎታን ለማግኘት በቂ አይደለም።

አራተኛው ምክንያት ዝግጁ የሆኑ የትንታኔ ዘዴዎች አለመኖር ነው. እያንዳንዱ ላቦራቶሪ የራሱ የሆነ ቅድሚያ የሚሰጣቸው ተግባራት አሉት, ለዚህም የራሱን ዘዴዎች ማዘጋጀት አስፈላጊ ነው. ይህንን መሳሪያ ቢያንስ 2-3 አመት ልምድ ባለው ሰው ሊከናወን ይችላል. አምራቾች አንዳንድ ጊዜ አንድ ወይም ሁለት አጠቃላይ የአመክንዮአዊ ተፈጥሮ ዘዴዎችን ያቀርባሉ, ነገር ግን ከላቦራቶሪ ልዩ ተግባራት ጋር አይጣጣሙም.

ውስጥ BioPharmExpert LLCበተለያዩ የጅምላ ስፔክትሮሜትሮች ላይ በመስራት የብዙ አመት ልምድ ያላቸው ልዩ ባለሙያተኞችን እንቀጥራለን፣ እንዲሁም ዘዴዎችን በማዘጋጀት እና ከፍተኛ ትንታኔዎችን በማከናወን ላይ። ስለዚህ የሚከተሉትን አገልግሎቶች እናቀርባለን።

1. ለደንበኛው ልዩ ተግባራት በጣም ጥሩውን የመሣሪያ ውቅር መምረጥ።
2. የታንዳም የጅምላ ስፔክትሮሜትሮችን ከዋነኞቹ አምራቾች ግዢ፣ አቅርቦትና ማስጀመር መሣሪያዎች ከጀመሩበት ቀን ጀምሮ በአንድ ዓመት ውስጥ የሰራተኞች የደረጃ በደረጃ ስልጠና።
3. መሰረታዊ ክሊኒካዊ ችግሮችን ለመፍታት ዝግጁ የሆኑ ቴክኒኮች እና የውሂብ ጎታዎች ስብስብ።
4. የትንታኔ ዘዴዎችን ማዳበር እና የደንበኛውን ልዩ ችግሮች በሠራተኞቻቸው ተሳትፎ በቤተ ሙከራው ውስጥ መፍታት ።
5. በሁሉም የሥራ ደረጃዎች ላይ ዘዴያዊ ድጋፍ.